| 摘要 | 第9-13页 |
| ABSTRACT | 第13-16页 |
| 主要符号说明 | 第17-19页 |
| 文献综述 基于免疫刺激和基因沉默的双功能靶向肿瘤基因免疫治疗 | 第19-33页 |
| 1. 肿瘤生长及肿瘤微环境的特点 | 第19-20页 |
| 2. 兼具靶基因沉默和免疫刺激作用的双功能免疫治疗 | 第20-22页 |
| 3. 双功能免疫治疗中抑制肿瘤生长的靶点 | 第22-23页 |
| 4. 刺激或唤起抗肿瘤免疫应答的策略 | 第23-26页 |
| 5. 双功能免疫疗法的应用 | 第26-29页 |
| 参考文献 | 第29-33页 |
| 1 前言 | 第33-34页 |
| 2 材料和方法 | 第34-50页 |
| 2.1 主要实验材料 | 第34-40页 |
| 2.1.1 细胞系 | 第34页 |
| 2.1.2 细胞培养基 | 第34-35页 |
| 2.1.3 STAT3激动剂和抑制剂 | 第35页 |
| 2.1.4 实验动物与试剂 | 第35页 |
| 2.1.5 流式细胞仪检测细胞表面分子所用的荧光标记抗体如表1所示 | 第35-36页 |
| 2.1.6 动物体内试验所用的试剂 | 第36页 |
| 2.1.7 PCR实实验材料 | 第36-38页 |
| 2.1.8 细胞转染试验中用到的试剂 | 第38页 |
| 2.1.9 流式细胞仪检测细胞凋亡试剂盒 | 第38页 |
| 2.1.10 一步法TUNEL检测细胞凋亡 | 第38页 |
| 2.1.11 Western Blot所需试剂 | 第38-40页 |
| 2.1.12 中量提取质粒所需试剂 | 第40页 |
| 2.1.13 细胞ELISA检测试剂盒 | 第40页 |
| 2.2 主要仪器设备 | 第40-41页 |
| 2.3 主要实验方法 | 第41-50页 |
| 2.3.1 细胞培养 | 第41页 |
| 2.3.2 细胞传代 | 第41-42页 |
| 2.3.3 细胞冻存 | 第42页 |
| 2.3.4 细胞复苏 | 第42页 |
| 2.3.5 小量中提质粒 | 第42-43页 |
| 2.3.6 用所提取的质粒转染细胞 | 第43页 |
| 2.3.7 细胞总RNA的提取 | 第43-44页 |
| 2.3.8 RT-PCR | 第44页 |
| 2.3.9 Real-time PCR | 第44-45页 |
| 2.3.10 Western-blot检测细胞蛋白水平 | 第45-47页 |
| 2.3.11 Transwell(小室)实验 | 第47页 |
| 2.3.12 ELISA检测细胞培养上清或小鼠血清中细胞因子的含量 | 第47-48页 |
| 2.3.13 流式细胞术检测细胞凋亡 | 第48页 |
| 2.3.14 一步法TUNEL检测细胞凋亡 | 第48-49页 |
| 2.3.15 小鼠黑色素瘤模型的建立 | 第49-50页 |
| 2.3.16 统计学分析 | 第50页 |
| 3 实验结果 | 第50-72页 |
| 3.1 黑色素瘤中Pim-3高表达 | 第50页 |
| 3.2 ssRNA-Pim-3-shRNA双功能质粒在黑色素瘤中的功能验证 | 第50-52页 |
| 3.3 ssRNA-Pim-3-shRNA双功能质粒对B16细胞凋亡的影响 | 第52-54页 |
| 3.4 ssRNA-Pim-3-shRNA双功能质粒对B16细胞增殖和周期的影响 | 第54-55页 |
| 3.5 ssRNA-Pim-3-shRNA双功能质粒体内抑制肿瘤的作用 | 第55-59页 |
| 3.6 NK、CD8~+T细胞在双功能载体介导的抗肿瘤治疗中发挥作用 | 第59-60页 |
| 3.7 pDC在双功能载体介导的抗肿瘤治疗中发挥作用 | 第60-64页 |
| 3.8 双功能载体及Pim-3-shRNA抑制黑色素瘤的肺转移 | 第64-65页 |
| 3.9 沉默Pim-3抑制B16细胞的迁移和侵袭 | 第65-67页 |
| 3.10 沉默Pim-3抑制B16细胞的上皮间质转换 | 第67-68页 |
| 3.11 Pim-3通过p-STAT3介导B16细胞的转移侵袭 | 第68-72页 |
| 5 讨论 | 第72-76页 |
| 参考文献 | 第76-81页 |
| 文章创新点及意义 | 第81-82页 |
| 攻读学位期间取得的成果和奖励 | 第82-83页 |
| 致谢 | 第83-84页 |
| 学位论文评阅及答辩情况表 | 第84页 |
