符号说明 | 第4-8页 |
中文摘要 | 第8-10页 |
Abstract | 第10-12页 |
1 前言 | 第13-24页 |
1.1 植物雄性不育 | 第13-15页 |
1.1.1 植物雄性不育性的分类 | 第13页 |
1.1.2 引起雄性不育的因素 | 第13-15页 |
1.1.2.1 遗传因素 | 第13-14页 |
1.1.2.2 环境因素 | 第14-15页 |
1.1.3 雄性不育在农业生产中的意义 | 第15页 |
1.2 绒毡层 | 第15-19页 |
1.2.1 绒毡层的发育模式 | 第15-16页 |
1.2.2 绒毡层发育的转录调控网络 | 第16-18页 |
1.2.3 绒毡层发育的信号调控网络 | 第18页 |
1.2.4 烟草绒毡层的研究进展 | 第18-19页 |
1.2.5 番茄绒毡层的研究进展 | 第19页 |
1.3 活性氧 | 第19-21页 |
1.3.1 活性氧的产生机制 | 第19页 |
1.3.2 活性氧的清除机制 | 第19-20页 |
1.3.3 活性氧的功能 | 第20-21页 |
1.3.4 活性氧在绒毡层中的功能 | 第21页 |
1.4 NADPH氧化酶 | 第21-23页 |
1.5 本研究的目的及意义 | 第23-24页 |
2 材料与方法 | 第24-37页 |
2.1 材料 | 第24-25页 |
2.1.1 植物材料及生长条件 | 第24页 |
2.1.2 菌株和质粒 | 第24页 |
2.1.3 酶与各种生化试剂 | 第24-25页 |
2.2 方法 | 第25-37页 |
2.2.1 植物基因组DNA及总RNA的提取 | 第25-27页 |
2.2.1.1 植物基因组DNA的提取 | 第25页 |
2.2.1.2 植物总RNA的提取(试剂盒法) | 第25-26页 |
2.2.1.3 反转录 | 第26-27页 |
2.2.2 基因扩增与表达载体构建 | 第27-32页 |
2.2.2.1 设计PCR引物 | 第27-28页 |
2.2.2.2 qRT PCR扩增 | 第28-29页 |
2.2.2.3 Phusion PCR扩增 | 第29页 |
2.2.2.4 回收PCR产物(试剂盒法) | 第29-30页 |
2.2.2.5 构建克隆载体 | 第30页 |
2.2.2.6 大肠杆菌转化及质粒提取(试剂盒法) | 第30-31页 |
2.2.2.7 质粒DNA的酶切连接 | 第31-32页 |
2.2.3 本生烟的遗传转化 | 第32-33页 |
2.2.3.1 农杆菌转化及鉴定 | 第32页 |
2.2.3.2 本生烟的栽培及遗传转化 | 第32-33页 |
2.2.3.3 转基因植物的筛选 | 第33页 |
2.2.4 组织学切片 | 第33-35页 |
2.2.4.1 石蜡切片 | 第33-34页 |
2.2.4.2 树脂切片 | 第34-35页 |
2.2.5 TUNEL(TdT-mediated dUTP nick end labeling)细胞凋亡检测 | 第35页 |
2.2.6 活性氧染色 | 第35-36页 |
2.2.6.1 NBT染色 | 第35-36页 |
2.2.6.2 H_2DCF-DA染色 | 第36页 |
2.2.7 DPI处理 | 第36-37页 |
3 结果与分析 | 第37-53页 |
3.1 绒毡层发育时期对应花器官大小的分析 | 第37-39页 |
3.1.1 烟草花器官大小对应绒毡层发育时期的确定 | 第37-38页 |
3.1.2 番茄花器官大小对应绒毡层发育时期的确定 | 第38-39页 |
3.2 烟草和番茄花药中活性氧含量的分析 | 第39-41页 |
3.2.1 烟草和番茄中活性氧含量是动态波动的 | 第39页 |
3.2.2 H_2DCF-DA染色及量化结果的分析 | 第39-41页 |
3.3 烟草树脂切片及透射电镜结果的分析 | 第41-43页 |
3.3.1 烟草绒毡层细胞的组织学分析 | 第41-42页 |
3.3.2 烟草绒毡层细胞PCD进程中超微结构的分析 | 第42-43页 |
3.4 烟草绒毡层PCD进程的分析 | 第43-44页 |
3.5 番茄树脂切片及透射电镜结果的分析 | 第44-47页 |
3.5.1 番茄绒毡层细胞的组织学分析 | 第44-46页 |
3.5.2 番茄绒毡层细胞PCD进程中超微结构的分析 | 第46-47页 |
3.6 番茄绒毡层PCD进程的分析 | 第47-48页 |
3.7 DPI处理烟草花药影响绒毡层的PCD | 第48-49页 |
3.7.1 DPI处理烟草花药降低了绒毡层中活性氧的含量 | 第48页 |
3.7.2 DPI处理烟草花药使绒毡层PCD延迟最终导致花粉败育 | 第48-49页 |
3.8 烟草和番茄中RBOH基因家族表达模式分析 | 第49-51页 |
3.9 NbRBOHE1基因沉默未引起绒毡层降解异常 | 第51-53页 |
4 讨论 | 第53-55页 |
5 结论 | 第55-56页 |
参考文献 | 第56-63页 |
致谢 | 第63-65页 |
攻读学位期间发表论文情况 | 第65页 |