| 摘要 | 第1-12页 |
| ABSTRACT | 第12-16页 |
| 缩略语 | 第16-19页 |
| 前言 | 第19-20页 |
| 第一章 文献综述 | 第20-40页 |
| 1. 细胞自噬 | 第20-27页 |
| ·细胞自噬概述 | 第20-21页 |
| ·细胞自噬的概念 | 第20页 |
| ·细胞自噬的分类 | 第20-21页 |
| ·细胞自噬与其他生理和病理过程 | 第21页 |
| ·酵母中细胞自噬的基本过程及分子机制 | 第21-26页 |
| ·细胞自噬的诱导 | 第23页 |
| ·自噬体的形成 | 第23-26页 |
| ·当前细胞自噬研究中尚未解决的关键问题 | 第26-27页 |
| ·细胞自噬水平的控制 | 第26-27页 |
| ·自噬体起源和膜的来源 | 第27页 |
| ·自噬体前体膜的延伸与封口 | 第27页 |
| 2. 酵母中Rab蛋白与囊泡运输 | 第27-34页 |
| ·Rab蛋白 | 第27页 |
| ·囊泡运输 | 第27-29页 |
| ·Rab蛋白调控囊泡运输 | 第29-34页 |
| ·Rab蛋白的修饰与膜定位 | 第30页 |
| ·Rab蛋白的激活 | 第30-31页 |
| ·Rab蛋白招募效应蛋白 | 第31-34页 |
| ·Rab蛋白的循环 | 第34页 |
| 3. Rab蛋白与细胞自噬 | 第34-38页 |
| ·Ypt1与细胞自噬 | 第34-35页 |
| ·Ypt31和Ypt32与细胞自噬 | 第35-36页 |
| ·Sec4与细胞自噬 | 第36页 |
| ·Ypt6与细胞自噬 | 第36-37页 |
| ·Ypt7与细胞自噬 | 第37页 |
| ·Vps21、Ypt52和Ypt53与细胞自噬 | 第37-38页 |
| 4. 展望 | 第38-40页 |
| 第二章 Vps21参与细胞自噬 | 第40-70页 |
| 1. 材料与方法 | 第40-55页 |
| ·菌株与质粒 | 第40-42页 |
| ·酵母菌株 | 第40-42页 |
| ·质粒 | 第42页 |
| ·培养基 | 第42页 |
| ·试剂 | 第42-43页 |
| ·仪器 | 第43页 |
| ·实验方法 | 第43-55页 |
| ·酵母相关遗传操作 | 第43-46页 |
| ·大肠杆菌相关操作 | 第46-48页 |
| ·基因克隆 | 第48-50页 |
| ·荧光观察 | 第50-51页 |
| ·Western blot | 第51-52页 |
| ·碱性磷酸酶活性测定 | 第52-54页 |
| ·透射电镜(TEM) | 第54-55页 |
| 2. 结果与分析 | 第55-67页 |
| ·vps21△菌株中Cvt途径和非选择性细胞自噬均受阻 | 第55-57页 |
| ·vps21△菌株中GFP-Atg8堆积成新月状结构 | 第57-59页 |
| ·vps21△菌株中GFP-Atg8的堆积过程 | 第59-61页 |
| ·Ypt52和Ypt53缺失不产生自噬缺陷 | 第61-62页 |
| ·透射电镜结果显示vps21△细胞中自噬体成簇堆积在液泡边沿 | 第62-64页 |
| ·vps21ts突变体中也存在自噬缺陷 | 第64-66页 |
| ·vps21△菌株中GFP-Atg8的分布与ypt7△不同 | 第66-67页 |
| 3. 本章小结 | 第67-68页 |
| 4. 本章讨论 | 第68-70页 |
| 第三章 Vps9作为Vps21的GEF参与细胞自噬 | 第70-80页 |
| 1. 材料与方法 | 第70-72页 |
| ·菌株与质粒 | 第70-71页 |
| ·酵母菌株 | 第70-71页 |
| ·质粒 | 第71页 |
| ·培养基 | 第71页 |
| ·试剂 | 第71页 |
| ·仪器 | 第71页 |
| ·实验方法 | 第71-72页 |
| 2. 结果与分析 | 第72-77页 |
| ·Vps9缺失导致与Vps21缺失相似的自噬缺陷 | 第72-74页 |
| ·过量表达Vps21可以抑制vps9△菌株中的自噬缺陷 | 第74-75页 |
| ·过量表达Vps21不能抑制vps9△muk1△双突变体中的自噬缺陷 | 第75-77页 |
| 3. 本章小结 | 第77页 |
| 4. 本章讨论 | 第77-80页 |
| 第四章 Vps21的下游效应物参与细胞自噬 | 第80-88页 |
| 1. 材料与方法 | 第80-82页 |
| ·菌株与质粒 | 第81页 |
| ·酵母菌株 | 第81页 |
| ·质粒 | 第81页 |
| ·培养基 | 第81页 |
| ·试剂 | 第81-82页 |
| ·仪器 | 第82页 |
| ·实验方法 | 第82页 |
| ·酵母相关遗传操作 | 第82页 |
| ·大肠杆菌相关操作 | 第82页 |
| ·荧光观察 | 第82页 |
| ·Western blot | 第82页 |
| 2. 结果与分析 | 第82-86页 |
| ·Vps21下游效应物突变体中存在与vps21△菌株相似的自噬缺陷 | 第82-83页 |
| ·Vps21和Ypt7效应复合体共有亚基突变体中GFP-Atg8表型不同于vps21△和ypt7△菌株 | 第83-86页 |
| 3. 本章小结 | 第86-87页 |
| 4. 本章讨论 | 第87-88页 |
| 第五章 Vps21模块参与细胞自噬的机制 | 第88-110页 |
| 1. 材料与方法 | 第88-94页 |
| ·菌株与质粒 | 第88-91页 |
| ·酵母菌株 | 第88-90页 |
| ·质粒 | 第90-91页 |
| ·培养基 | 第91页 |
| ·试剂 | 第91页 |
| ·仪器 | 第91页 |
| ·实验方法 | 第91-94页 |
| ·酵母相关遗传操作 | 第91页 |
| ·大肠杆菌相关操作 | 第91页 |
| ·基因克隆 | 第91页 |
| ·酵母双杂交(Yeast Two Hybrid,Y2H) | 第91-93页 |
| ·荧光观察 | 第93页 |
| ·Western blot | 第93页 |
| ·蛋白酶保护实验(proteinase protection assay) | 第93-94页 |
| 2. 结果与分析 | 第94-107页 |
| ·Vps21定位于PAS位点且在下游效应物突变体中的定位增强 | 第94-96页 |
| ·酵母双杂交筛选结果显示Vps21模块蛋白与自噬相关蛋白存在互作 | 第96-97页 |
| ·Vps21和Vps8与PI3K复合体亚基的互作 | 第97-99页 |
| ·Vps21模块蛋白缺失导致Vps34定位到PAS减少 | 第99-100页 |
| ·Vps8的N端结构域缺失后不能与Vps34互作 | 第100-103页 |
| ·Vps8结构域EFF和C-term缺失不能抑制vps8△菌株中Vps34的错误定位 | 第103页 |
| ·Vps8结构域EFF和C-term缺失不能抑制vps8△菌株的自噬缺陷 | 第103-105页 |
| ·Vps21模块蛋白缺失菌株中堆积的自噬体未封口 | 第105-106页 |
| ·Vps21模块参与细胞自噬的可能机制 | 第106-107页 |
| 3. 本章小结 | 第107-108页 |
| 4. 本章讨论 | 第108-110页 |
| 全文总结 | 第110-112页 |
| 本论文创新之处 | 第112-114页 |
| 本研究的不足之处及展望 | 第114-116页 |
| 参考文献 | 第116-128页 |
| 附录一 培养基、常备试剂与缓冲液的配制 | 第128-136页 |
| 附录二 本论文中用到的引物 | 第136-142页 |
| 附录三 攻读博士期间发表的论文 | 第142-144页 |
| 致谢 | 第144页 |
