Maspin基因对宫颈鳞癌SiHa细胞生物学行为的影响及临床意义

【摘要】：目的：1.构建maspin基因真核表达载体pc3-maspin,以脂质体法将pc3-maspin稳定转染至宫颈鳞癌SiHa细胞株。2.检测转染前后maspin mRNA及蛋白在SiHa细胞株中的表达变化。3.稳定转染成功后检测maspin基因高表达对SiHa细胞生物学行为的影响,探讨maspin在宫颈鳞癌发生、发展过程中的作用。方法：定量逆转录聚合酶链反应(real time RT-PCR)及半定量逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)法检测转染前后SiHa细胞中maspin mRNA的表达差异,Western Blot及细胞免疫化学技术(SABC法)检测转染前后SiHa细胞中maspin蛋白的表达差异。MTT比色法检测转染前后细胞增殖能力的变化,流式细胞技术检测转染前后SiHa细胞的凋亡率和细胞周期以观察SiHa细胞生物学行为的变化。结果：maspm真核表达质粒以脂质体法稳定转染宫颈鳞癌SiHa细胞株后,RT-PCR及real time RT-PCR在转录水平上显示转染目的基因的SiHa细胞(SiHa-m)中mRNA表达较转染空载体组(SiHa-p)和空白对照组(SiHa)明显上调(P0.05),SiHa-p组与SiHa组之间无显著差异(P0.05)；Western Blot及IHC技术均显示转染maspin基因的SiHa细胞(SiHa-m)中masp in蛋白的表达明显上调(P0.05),SiHa-p组与SiHa组之间无显著差异(P0.05)；MTT法测定显示SiHa-m细胞增殖能力较SiHa-p组和SiHa组明显降低(P0.05),SiHa-p组与SiHa组之间无显著差异(P0.05)；流式细胞技术测定凋亡率,结果显示SiHa-m组凋亡率较SiHa-p组和SiHa组显著升高(P0.05),SiHa-p组与SiHa组之间无显著差异(P0.05)；细胞周期结果显示SiHa-m组G1期细胞比例较SiHa-p组和SiHa组明显增多,S期细胞比例较SiHa-p组和SiHa组明显减少(P0.05)；SiHa-p与SiHa组在细胞周期及凋亡率方面无显著性差异(P0.05)。结论：maspin基因能明显抑制SiHa细胞的增殖能力,提示maspin在宫颈癌组织中起着肿瘤抑制作用,其有望成为子宫颈鳞癌新的基因治疗靶点。但仍需进一步的试验研究来探究masp in抑制子宫颈癌细胞生长的作用机制。
【关键词】：maspin 宫颈鳞癌 Western blot SiHa细胞
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2014
【分类号】：R737.33