DC与蜕膜NK细胞的相互作用在弓形虫感染致不良妊娠结局中的作用机制研究

【摘要】：目的：探索树突状细胞(DC)与蜕膜自然杀伤细胞(uNK)之间的相互作用在刚地弓形虫(Toxoplasma gondii)感染致不良妊娠结局中分子免疫机制。方法：体外纯化的来自正常妊娠的C57BL/6小鼠的uNK细胞和正常小鼠骨髓诱导而来的DCs以5：1的比例在弓形虫感染或不感染的情况下进行共培养24小时。设transwell小室隔开组和直接接触组。同时建立弓形虫感染C57BL/6孕鼠模型。体内将24只C57BL/6孕鼠按完全随机分组法分为感染组(12只)和对照组(12只),感染组小鼠于孕8天每只腹腔注射400个RH株刚地弓形虫速殖子,对照组注射等量无菌PBS,所有孕鼠均于孕14天时处死,观察胎盘及胎鼠的发育情况。用流式细胞仪分析uNK细胞上白细胞介素12受体(IL-12R)、抑制性受体NKG2A和活化性受体NKG2D的表达情况。用ELISA方法测定细胞培养上清和胎盘中IL-12和IFN-y的水平。共培养组并加设抗IL-12抗体组。用流式细胞仪检测uNK细胞的杀伤活性。结果：体内实验,在孕14d感染组小鼠的胎盘出血坏死较多,未感染的对照组小鼠胎盘血供丰富。感染组小鼠的死胎率比对照组小鼠显着增加(p0.01)。弓形虫感染后IL-12R、NKG2A和NKG2D的表达水平均上调,但活化性受体NKG2D比抑制性受体NKG2A升高更为明显。共培养组在弓形虫感染后NKG2D的表达水平及uNK细胞的细胞毒性比单独uNK细胞感染组升高明显,且共培养组上清液中的IL-12和IFN-y水平比单独的uNK细胞组、单纯DC组升高明显。在共培养组加入抗IL-12抗体时,IFN-γ的增强不明显。在感染孕鼠的胎盘中IL-12和IFN-y的水平较正常孕鼠组也显著增加。结论：弓形虫感染后,DC细胞通过分泌IL-12与uNK细胞表面的IL-12R相互作用,从而促进uNK细胞的活化、IFN-γ分泌增多和细胞毒性增强从而导致不良妊娠结局的发生,这可能是弓形虫感染致不良妊娠结局的重要的免疫机制之一。
【关键词】：IL-12 IL-12受体 刚地弓形虫 不良妊娠结局
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2014
【分类号】：R714.251