几个诱导植物细胞死亡稻瘟菌效应蛋白的功能分析
| 摘要 | 第1-8页 |
| Abstract | 第8-10页 |
| 第一部分 引言 | 第10-23页 |
| 1 稻瘟病及稻瘟病菌概述 | 第10-11页 |
| ·稻瘟病及其危害 | 第10页 |
| ·稻瘟病菌的生活史 | 第10页 |
| ·稻瘟病菌的侵染途径 | 第10-11页 |
| 2 植物免疫系统 | 第11-14页 |
| 3 植物病程相关基因 | 第14-15页 |
| 4 效应蛋白研究进展 | 第15-19页 |
| ·植物病原细菌效应因子 | 第15-16页 |
| ·植物病原真菌效应因子 | 第16页 |
| ·植物病原卵菌效应因子 | 第16-17页 |
| ·稻瘟病菌效应因子 | 第17-19页 |
| 5 水稻抗性蛋白研究进展 | 第19页 |
| 6 本课题研究背景 | 第19-21页 |
| 7 本研究的意义 | 第21-23页 |
| 第二部分 材料与方法 | 第23-32页 |
| 1 实验材料 | 第23页 |
| ·供试菌株 | 第23页 |
| ·供试载体 | 第23页 |
| ·供试植物 | 第23页 |
| ·实验试剂和主要仪器 | 第23页 |
| 2 实验方法 | 第23-32页 |
| ·过表达载体的构建 | 第23-25页 |
| ·敲除载体的构建 | 第25-26页 |
| ·稻瘟菌原生质体转化 | 第26-27页 |
| ·稻瘟菌转化子菌DNA的粗提取和验证 | 第27页 |
| ·过表达和敲除转化子的表型分析 | 第27-28页 |
| ·转化子菌株生长速率的测定和形态观察 | 第27-28页 |
| ·转化子菌株产孢量统计 | 第28页 |
| ·转化子菌株致病性分析 | 第28页 |
| ·原核表达载体的构建和诱导表达 | 第28-30页 |
| ·蛋白接种实验 | 第30-31页 |
| ·qRT-PCR检测目标基因相对表达水平 | 第31-32页 |
| 第三部分 结果与分析 | 第32-55页 |
| 1 效应蛋白基因的表达模式分析 | 第32-33页 |
| 2 过表达和敲除载体的构建与鉴定 | 第33-38页 |
| ·过表达载体的构建与鉴定 | 第33-35页 |
| ·过表达转化子相对表达量分析 | 第35-37页 |
| ·敲除载体的构建与鉴定 | 第37-38页 |
| 3 过表达和敲除突变体生长速率的测定和形态观察 | 第38-41页 |
| 4 过表达和敲除突变体产孢量分析 | 第41-42页 |
| 5 过表达和敲除突变体致病性分析 | 第42-45页 |
| ·大麦叶片离体接种 | 第42-43页 |
| ·叶片病斑孢子含量的测定 | 第43-44页 |
| ·过表达菌株对致病速度的影响 | 第44-45页 |
| 6 原核表达载体的构建与鉴定 | 第45-47页 |
| 7 重组蛋白的诱导表达及亲和纯化 | 第47-50页 |
| ·重组蛋白可溶性检测 | 第47-49页 |
| ·可溶性重组蛋白的亲和纯化 | 第49-50页 |
| 8 重组蛋白对水稻抗性的影响 | 第50-55页 |
| ·高浓度重组蛋白诱发水稻叶片枯死 | 第50-51页 |
| ·水稻PR基因表达水平明显上调 | 第51-54页 |
| ·低浓度重组蛋白增强水稻基础抗性 | 第54-55页 |
| 第四部分 讨论 | 第55-59页 |
| 第五部分 后续工作安排 | 第59-60页 |
| 参考文献 | 第60-68页 |
| 附录1 主要试剂和仪器 | 第68-70页 |
| 附录2 常用培养基和溶液配方 | 第70-74页 |
| 附录3 实验方法 | 第74-79页 |
| 附录4 实验相关引物序列 | 第79-83页 |
| 附录5 载体构建图 | 第83-86页 |
| 致谢 | 第86页 |
