| 摘要 | 第1-7页 |
| ABSTRACT | 第7-12页 |
| 第一章 绪论 | 第12-23页 |
| ·2-酮基葡萄糖酸概述 | 第12-16页 |
| ·2-酮基葡萄糖酸的理化性质及应用 | 第12页 |
| ·2-酮基葡萄糖酸的生产方法 | 第12-13页 |
| ·2-酮基葡萄糖酸生产菌株的选育及改良 | 第13-16页 |
| ·假单胞菌 2-酮基葡萄糖酸生物合成中的碳代谢阻遏现象 | 第16页 |
| ·假单胞菌 2-酮基葡萄糖酸的合成与代谢 | 第16-20页 |
| ·假单胞菌的葡萄糖代谢 | 第16-19页 |
| ·假单胞菌的 2-酮基葡萄糖酸代谢 | 第19-20页 |
| ·基因敲除技术及其应用 | 第20-21页 |
| ·基因敲除技术 | 第20页 |
| ·同源重组技术 | 第20页 |
| ·基因敲除技术在基因功能研究及生产菌株改良方面的应用 | 第20-21页 |
| ·选题背景及意义 | 第21-22页 |
| ·研究的主要内容 | 第22-23页 |
| 第二章 变形假单胞菌 2-酮基葡萄糖酸操纵子的克隆及生物信息学分析 | 第23-42页 |
| ·实验材料 | 第23-26页 |
| ·菌株及质粒 | 第23-24页 |
| ·培养基 | 第24页 |
| ·主要试剂及溶液 | 第24-25页 |
| ·主要仪器与设备 | 第25-26页 |
| ·实验方法 | 第26-29页 |
| ·PCR引物的设计与合成 | 第26页 |
| ·目的基因片段的扩增 | 第26页 |
| ·细菌基因组DNA的提取 | 第26页 |
| ·大肠杆菌感受态细胞制备 | 第26-27页 |
| ·PCR产物的回收 | 第27页 |
| ·重组质粒的构建 | 第27页 |
| ·重组质粒的转化 | 第27页 |
| ·质粒DNA的提取 | 第27-28页 |
| ·重组质粒的验证 | 第28页 |
| ·生物信息学分析 | 第28-29页 |
| ·实验结果及分析 | 第29-40页 |
| ·变形假单胞菌基因组DNA的提取 | 第29页 |
| ·变形假单胞菌kgu操纵子的克隆 | 第29页 |
| ·重组质粒的构建 | 第29-30页 |
| ·变形假单胞菌kgu操纵子的基因组成 | 第30-31页 |
| ·变形假单胞菌kgu操纵子的非编码序列分析 | 第31-32页 |
| ·变形假单胞菌kgu操纵子中各基因的生物信息学分析 | 第32-40页 |
| ·本章小结 | 第40-42页 |
| 第三章 变形假单胞菌 2-酮基葡萄糖酸还原酶及 2-酮基葡萄糖酸异构酶基因的克隆与表达 | 第42-57页 |
| ·实验材料 | 第42-45页 |
| ·菌株及质粒 | 第42-43页 |
| ·主要试剂及配制 | 第43-45页 |
| ·主要仪器和设备 | 第45页 |
| ·实验方法 | 第45-50页 |
| ·PCR引物的设计 | 第45页 |
| ·目的基因片段的PCR扩增 | 第45页 |
| ·PCR产物与表达质粒的双酶切处理 | 第45-46页 |
| ·重组质粒的构建 | 第46-47页 |
| ·重组蛋白的诱导表达 | 第47页 |
| ·表达产物的电泳分析 | 第47-48页 |
| ·Western-blot检测 | 第48-49页 |
| ·KguK与KguD的联合酶活测定 | 第49-50页 |
| ·实验结果 | 第50-56页 |
| ·PCR扩增目的片段 | 第50-51页 |
| ·重组质粒的构建 | 第51-54页 |
| ·重组菌的构建及重组蛋白的诱导表达 | 第54-55页 |
| ·KguD在变形假单胞菌 2KGA分解代谢中的作用 | 第55-56页 |
| ·本章小结 | 第56-57页 |
| 第四章 2-酮基葡萄糖酸转运蛋白基因的敲除及其对变形假单胞菌JUIM01发酵特性的影响 | 第57-73页 |
| ·实验材料 | 第57-60页 |
| ·菌株及质粒 | 第57-58页 |
| ·培养基及培养方法 | 第58-59页 |
| ·主要试剂 | 第59-60页 |
| ·主要仪器和设备 | 第60页 |
| ·实验方法 | 第60-65页 |
| ·PCR引物的设计与合成 | 第60页 |
| ·kguT缺失片段的克隆 | 第60-61页 |
| ·重组质粒的构建 | 第61-62页 |
| ·变形假单胞菌电转感受态细胞的制备及电转化 | 第62-63页 |
| ·缺失基因kguT的转化子筛选及鉴定 | 第63-65页 |
| ·回补实验 | 第65页 |
| ·发酵过程参数的测定 | 第65页 |
| ·实验结果及分析 | 第65-71页 |
| ·变形假单胞菌kguT基因的克隆 | 第65-66页 |
| ·变形假单胞菌kguT缺失片段的扩增 | 第66-67页 |
| ·变形假单胞菌kguT敲除载体的构建 | 第67页 |
| ·变形假单胞菌kguT敲除菌株的筛选和验证 | 第67-68页 |
| ·变形假单胞菌JUIM01△kguT的kguT基因回补 | 第68-69页 |
| ·kguT基因的敲除对变形假单胞菌JUIM01发酵特性的影响 | 第69-71页 |
| ·本章小结 | 第71-73页 |
| 第五章 结论与展望 | 第73-76页 |
| ·全文主要结论 | 第73-74页 |
| ·存在问题及展望 | 第74-76页 |
| 参考文献 | 第76-82页 |
| 致谢 | 第82-83页 |
| 在攻读硕士学位期间发表的论文 | 第83页 |
