| 摘要 | 第1-7页 |
| ABSTRACT | 第7-12页 |
| 第一部分 | 第12-54页 |
| 第一章 绪论 | 第14-28页 |
| ·ErbB2过表达与肿瘤发生 | 第14-19页 |
| ·ErbB家族结构和功能 | 第14-16页 |
| ·ErbB家族与肿瘤发生 | 第16页 |
| ·ErbB2过表达与乳腺癌 | 第16-17页 |
| ·ErbB2为靶标的肿瘤治疗和抗体药物开发 | 第17-19页 |
| ·噬菌体展示及抗体工程化 | 第19-23页 |
| ·噬菌体展示技术 | 第19-20页 |
| ·抗体工程化 | 第20-23页 |
| ·高通量芯片合成及高通量测序技术 | 第23-28页 |
| ·高通量芯片合成概要 | 第23-24页 |
| ·高通量测序技术概要 | 第24-28页 |
| 第二章 实验材料和方法 | 第28-36页 |
| ·实验材料,仪器和试剂 | 第28页 |
| ·实验方法 | 第28-36页 |
| ·数据库分析和CDR多样化 | 第28-29页 |
| ·寡聚核苷酸库设计和微流体芯片合成 | 第29页 |
| ·构建突变体scFv库 | 第29-32页 |
| ·样品准备和Illumina测序 | 第32页 |
| ·序列数据分析 | 第32页 |
| ·表达纯化重组抗原 | 第32-33页 |
| ·噬菌体淘洗 | 第33页 |
| ·噬菌体酶联免疫吸附试验 | 第33页 |
| ·ScFv-Fc表达和扫描ELISA | 第33-34页 |
| ·离子表面等离子共振 | 第34-36页 |
| 第三章 实验结果 | 第36-50页 |
| ·实验背景简介 | 第36-37页 |
| ·实验结果 | 第37-50页 |
| ·芯片合成寡核苷酸用于抗体库构建 | 第37-39页 |
| ·高通量测序鉴定库各项参数 | 第39-42页 |
| ·库筛选和靶标结合扫描 | 第42-44页 |
| ·高通量测序分析筛选后序列进化 | 第44-47页 |
| ·高通量测序数据用于氨基酸富集分析 | 第47-48页 |
| ·高通量测序方法对候选克隆的鉴定 | 第48页 |
| ·构建并筛选组合库 | 第48-50页 |
| 第四章 讨论及总结 | 第50-54页 |
| ·讨论 | 第50-52页 |
| ·总结 | 第52-54页 |
| 第二部分 | 第54-90页 |
| 第一章 绪论 | 第56-68页 |
| ·细菌转录装置关键元件 | 第56-60页 |
| ·细菌RNA核心聚合酶 | 第56-57页 |
| ·细菌sigma因子 | 第57-59页 |
| ·细菌σ 70-RNAP全酶 | 第59-60页 |
| ·实验室经典定向进化 | 第60-65页 |
| ·定向进化中的策略和技术 | 第60-63页 |
| ·定向进化中的screening和slection | 第63-65页 |
| ·噬菌体辅助连续定向进化 | 第65-68页 |
| 第二章 实验材料和方法 | 第68-76页 |
| ·实验材料,仪器和试剂 | 第68-69页 |
| ·实验方法 | 第69-76页 |
| ·DNA克隆 | 第69-70页 |
| ·Top10化学感受态制备 | 第70页 |
| ·TG1电转感受态制备和转化 | 第70-71页 |
| ·不连续侵染实验 | 第71-72页 |
| ·恒化器装置组装 | 第72页 |
| ·PACE实验 | 第72页 |
| ·突变率检测实验 | 第72-73页 |
| ·体内Sigma 70突变体活性检测 | 第73-76页 |
| 第三章 实验结果、讨论及总结 | 第76-90页 |
| ·前期研究背景及噬菌体系统 | 第76-77页 |
| ·实验结果 | 第77-88页 |
| ·定向进化靶标基因的选择 | 第77页 |
| ·与Sigma70无/有相互作用靶标启动子的选择 | 第77-79页 |
| ·M13噬菌体修饰 | 第79-81页 |
| ·辅助质粒上靶标启动子对宿主外噬菌体的影响 | 第81-82页 |
| ·PACE系统进化RpoD-R588H蛋白及其报告系统 | 第82-84页 |
| ·PACE系统中突变质粒促突变效率检测 | 第84-87页 |
| ·PACE系统中对靶标基因体外建库 | 第87-88页 |
| ·讨论 | 第88-89页 |
| ·总结 | 第89-90页 |
| 参考文献 | 第90-110页 |
| 致谢 | 第110-112页 |
| 在读期间发表的学术论文与取得的研究成果 | 第112页 |