| 摘要 | 第1-6页 |
| ABSTRACT | 第6-12页 |
| 第1章 前言 | 第12-22页 |
| ·漆酶的简介 | 第12-19页 |
| ·漆酶的来源 | 第12页 |
| ·漆酶的理化性质 | 第12-15页 |
| ·漆酶的结构及催化机理 | 第15-16页 |
| ·漆酶的作用底物 | 第16页 |
| ·漆酶的应用价值 | 第16-19页 |
| ·漆酶的定向进化 | 第19-20页 |
| ·酶的定向进化 | 第19页 |
| ·漆酶的定向进化 | 第19-20页 |
| ·本研究的目的与意义 | 第20-21页 |
| ·本研究的主要内容 | 第21-22页 |
| 第2章 漆酶基因lac1338的表达条件优化及酶学性质 | 第22-47页 |
| ·实验材料 | 第22-25页 |
| ·菌株与质粒 | 第22页 |
| ·工具酶、试剂盒、抗生素及其它生化试剂 | 第22-23页 |
| ·培养基的配制 | 第23页 |
| ·琼脂糖电泳相关溶液 | 第23页 |
| ·酶活力测定 | 第23页 |
| ·主要溶液 | 第23-24页 |
| ·其它 | 第24-25页 |
| ·主要仪器和设备 | 第25页 |
| ·实验方法 | 第25-34页 |
| ·漆酶基因lac1338的引物设计及合成 | 第25页 |
| ·漆酶基因lac1338的克隆 | 第25-26页 |
| ·PCR产物的纯化 | 第26页 |
| ·PCR产物和载体的双酶切、回收 | 第26-27页 |
| ·目的基因lac1338与载体连接 | 第27页 |
| ·E .coli BL21 (DE3) 钙转感受态细胞的制备及转化 | 第27-28页 |
| ·重组克隆子的鉴定 | 第28页 |
| ·重组表达菌株表达条件的优化及纯化 | 第28-31页 |
| ·重组漆酶Lac1338的SDS-PAGE凝胶检测 | 第31-32页 |
| ·重组漆酶Lac1338的酶学性质研究 | 第32-33页 |
| ·重组漆酶Lac1338对染料降解的研究 | 第33-34页 |
| ·结果 | 第34-44页 |
| ·漆酶基因lac1338的克隆 | 第34页 |
| ·表达菌株的构建 | 第34-35页 |
| ·重组漆酶表达条件的优化 | 第35-40页 |
| ·重组漆酶HIS-Lac1338的纯化及蛋白浓度测定 | 第40-41页 |
| ·重组漆酶Lac1338的酶学性质研究 | 第41-44页 |
| ·重组漆酶Lac1338对环境污染物降解的研究 | 第44-45页 |
| ·结论及讨论 | 第45-47页 |
| 第3章 漆酶基因lac1338的定向进化研究 | 第47-62页 |
| ·引言 | 第47页 |
| ·材料 | 第47-48页 |
| ·菌株和质粒 | 第47页 |
| ·主要仪器和设备 | 第47-48页 |
| ·生化试剂 | 第48页 |
| ·酶类 | 第48页 |
| ·培养基 | 第48页 |
| ·缓冲液 | 第48页 |
| ·方法 | 第48-53页 |
| ·突变模板制备 | 第48页 |
| ·易错PCR扩增漆酶基因lac1338 | 第48-49页 |
| ·酶切 | 第49-50页 |
| ·酶切产物回收 | 第50页 |
| ·DNA片段的连接反应 | 第50页 |
| ·连接产物的回收纯化 | 第50页 |
| ·大肠杆菌BL21(DE3)电击感受态细胞的制备 | 第50-51页 |
| ·连接产物的电击转化 | 第51页 |
| ·重组质粒的鉴定 | 第51页 |
| ·筛选酶活力提高的突变子 | 第51-52页 |
| ·突变酶酶学性质研究 | 第52页 |
| ·突变株染料降解率研究 | 第52页 |
| ·突变酶三维结构预测及突变位点分析 | 第52-53页 |
| ·结果 | 第53-59页 |
| ·易错PCR产生突变漆酶基因及突变文库构建 | 第53-54页 |
| ·高活性漆酶突变子的初筛 | 第54-55页 |
| ·表达高活性漆酶突变子的复筛 | 第55页 |
| ·突变子漆酶基因的序列测序 | 第55-56页 |
| ·突变酶酶学性质 | 第56-58页 |
| ·突变株的染料降解率 | 第58页 |
| ·突变株三维结构模拟 | 第58-59页 |
| ·结论及讨论 | 第59-62页 |
| 第4章 突变株响应面优化产酶条件 | 第62-69页 |
| ·引言 | 第62页 |
| ·材料 | 第62页 |
| ·菌株和质粒 | 第62页 |
| ·主要仪器和设备 | 第62页 |
| ·生化试剂 | 第62页 |
| ·方法 | 第62-63页 |
| ·Plackett-Burmen试验设计筛选影响漆酶表达条件的显著性因素 | 第62-63页 |
| ·响应面分析法对影响漆酶表达的关键因素进行进一步研究 | 第63页 |
| ·结果 | 第63-68页 |
| ·Plackett-Burmen试验结果分析 | 第63-64页 |
| ·响应面分析试验结果 | 第64-68页 |
| ·讨论 | 第68-69页 |
| 第5章 总结与展望 | 第69-72页 |
| ·结论 | 第69-70页 |
| ·展望 | 第70-72页 |
| 参考文献 | 第72-78页 |
| 硕士期间发表的文章 | 第78-79页 |
| 致谢 | 第79页 |
