| 摘要 | 第1-7页 |
| Abstract | 第7-13页 |
| 图目录 | 第13-15页 |
| 表目录 | 第15-16页 |
| 英文缩略表 | 第16-17页 |
| 第一章 绪论 | 第17-23页 |
| ·嗜热微生物及嗜热酶研究进展 | 第17-18页 |
| ·嗜热微生物 | 第17页 |
| ·嗜热酶及其应用 | 第17-18页 |
| ·α-半乳糖苷酶的研究进展 | 第18-22页 |
| ·α-半乳糖苷酶的来源 | 第18-20页 |
| ·α-半乳糖苷酶的特性 | 第20页 |
| ·α-半乳糖苷酶的分类 | 第20-21页 |
| ·α-半乳糖苷酶的结构与功能 | 第21-22页 |
| ·α-半乳糖苷酶的应用 | 第22页 |
| ·研究目的和意义 | 第22-23页 |
| 第二章 嗜热微生物来源的 27 家族α-半乳糖苷酶的纯化与性质研究 | 第23-35页 |
| ·实验材料 | 第23页 |
| ·菌株 | 第23页 |
| ·仪器和主要试剂 | 第23页 |
| ·培养基 | 第23页 |
| ·常用试剂 | 第23页 |
| ·实验方法 | 第23-29页 |
| ·产α-半乳糖苷酶能力的验证 | 第23-24页 |
| ·酶活性测定 | 第24页 |
| ·对硝基苯酚标准曲线的制定 | 第24-25页 |
| ·α-半乳糖苷酶的分离纯化 | 第25页 |
| ·蛋白性质测定 | 第25-27页 |
| ·纯化蛋白的质谱鉴定 | 第27页 |
| ·纯化蛋白 Gal27A 的性质测定 | 第27-29页 |
| ·结果与分析 | 第29-33页 |
| ·萨托菌 P1 产α-半乳糖苷酶能力的分析 | 第29页 |
| ·α-半乳糖苷酶 Gal27A 的纯化 | 第29-30页 |
| ·氨基酸序列结果分析 | 第30页 |
| ·α-半乳糖苷酶 Gal27A 的性质分析 | 第30-33页 |
| ·讨论 | 第33页 |
| 本章小结 | 第33-35页 |
| 第三章 嗜热微生物来源的 27 家族α-半乳糖苷酶的基因克隆、表达与性质研究 | 第35-64页 |
| ·实验材料 | 第35-36页 |
| ·菌株、质粒和培养基 | 第35页 |
| ·仪器和主要试剂 | 第35页 |
| ·引物合成和 DNA 测序 | 第35页 |
| ·试剂盒、酶和生化试剂 | 第35-36页 |
| ·实验方法 | 第36-45页 |
| ·引物设计 | 第36-37页 |
| ·真菌 DNA 的提取 | 第37页 |
| ·基因 gal27A、gal27B 和 aga27A 的克隆和序列分析 | 第37-40页 |
| ·RNA 的提取与 cDNA 的获得 | 第40-41页 |
| ·真核表达载体 pPIC9-gal27A、 pPIC9-gal27B 和 pPIC9-aga27A 的构建 | 第41-42页 |
| ·重组酶 rGal27A、rGal27B 和 rAga27A 在毕赤酵母中的表达与纯化 | 第42-44页 |
| ·酶学性质测定 | 第44-45页 |
| ·α-半乳糖苷酶 rGal27A 对豆奶的降解 | 第45页 |
| ·α-半乳糖苷酶 rGal27A，rGal27B 和甘露聚糖酶 Man5P1 的协同降解实验29 | 第45页 |
| ·结果与分析 | 第45-62页 |
| ·基因序列与结构分析 | 第45-50页 |
| ·目的基因的异源表达与纯化 | 第50-51页 |
| ·重组酶 rGal27A、rGal27B 和 rAga27A 酶学性质分析 | 第51-57页 |
| ·α-半乳糖苷酶 rGal27A 对豆奶的降解 | 第57页 |
| ·α-半乳糖苷酶 rGal27A、rGal27B 和甘露聚糖酶 Man5P1 的协同降解实验 | 第57-62页 |
| ·讨论 | 第62页 |
| ·后续工作 | 第62-63页 |
| ·loop 区替换的设计 | 第63页 |
| ·点突变的设计 | 第63页 |
| ·蛋白晶体工作 | 第63页 |
| 本章小结 | 第63-64页 |
| 第四章 嗜热微生物来源的 36 家族α-半乳糖苷酶的基因克隆、表达与性质研究 | 第64-81页 |
| ·实验材料 | 第64页 |
| ·菌株和质粒 | 第64页 |
| ·培养基 | 第64页 |
| ·引物合成和 DNA 测序 | 第64页 |
| ·试剂盒、酶和生化试剂 | 第64页 |
| ·实验方法 | 第64-69页 |
| ·引物设计 | 第64-65页 |
| ·基因组 DNA 提取 | 第65页 |
| ·基因 gal36A4 和 gal36P1 的克隆与序列分析 | 第65-66页 |
| ·原核表达载体 pET28a-gal36A4 与 pET28a-gal36P1 的构建 | 第66-67页 |
| ·重组质粒的转化、目的基因的诱导表达与纯化 | 第67-68页 |
| ·重组酶 rGal36A4 和 rGal36P1 的性质测定 | 第68-69页 |
| ·α-半乳糖苷酶 rGal36A4 的转糖苷作用 | 第69页 |
| ·结果与分析 | 第69-79页 |
| ·序列与结构分析 | 第69-73页 |
| ·目的基因的异源表达与纯化 | 第73页 |
| ·重组酶 rGal36A4 和 rGal36P1 的酶学性质分析 | 第73-78页 |
| ·α-半乳糖苷酶 rGal36A4 的转糖苷作用 | 第78-79页 |
| ·讨论 | 第79-80页 |
| 本章小结 | 第80-81页 |
| 第五章 全文结论 | 第81-82页 |
| 参考文献 | 第82-88页 |
| 致谢 | 第88-89页 |
| 作者简历 | 第89页 |
