| 摘要 | 第1-6页 |
| Abstract | 第6-13页 |
| 第一章 文献综述 | 第13-25页 |
| 1 大黄鱼概况 | 第13-14页 |
| ·经济价值 | 第13-14页 |
| ·主要病害 | 第14页 |
| 2 鱼类的免疫系统 | 第14-16页 |
| ·免疫器官 | 第14-15页 |
| ·免疫应答 | 第15-16页 |
| 3 鱼类免疫学研究概况 | 第16-18页 |
| 4 小G蛋白研究进展 | 第18-23页 |
| ·Ran蛋白的基本特征与研究进展 | 第19-21页 |
| ·Rab蛋白的基本特征与研究进展 | 第21-22页 |
| ·Rac蛋白的基本特征与研究进展 | 第22-23页 |
| 5 本论文研究目的及意义 | 第23-25页 |
| 第二章 Ran分子特征和功能研究 | 第25-70页 |
| 1 材料 | 第25-28页 |
| ·实验动物 | 第25-26页 |
| ·菌株与质粒 | 第26页 |
| ·主要药品与试剂 | 第26-27页 |
| ·引物 | 第27-28页 |
| 2 实验方法 | 第28-37页 |
| ·RNA的提取与检测 | 第28-29页 |
| ·cDNA第一条链的合成 | 第29-30页 |
| ·cDNA第一条链的纯化 | 第30页 |
| ·cDNA 3’末端添加Poly C | 第30-31页 |
| ·扩增基因3’末端 | 第31页 |
| ·扩增基因5’末端 | 第31页 |
| ·PCR反应 | 第31页 |
| ·回收目的片段 | 第31-32页 |
| ·生物信息学分析 | 第32页 |
| ·实时荧光定量PCR反应体系及条件 | 第32-33页 |
| ·质粒小量提取 | 第33页 |
| ·原核表达载体的构建 | 第33页 |
| ·原核表达目的基因 | 第33-34页 |
| ·重组蛋白纯化 | 第34-35页 |
| ·制备多克隆抗体 | 第35页 |
| ·Protein A法纯化抗血清 | 第35页 |
| ·酶联免疫分析(ELISA) | 第35页 |
| ·Western Blot | 第35-36页 |
| ·GTP结合实验 | 第36页 |
| ·GST pull-down assay | 第36页 |
| ·蛋白质质谱分析 | 第36-37页 |
| 3 结果与分析 | 第37-68页 |
| ·大黄鱼Ran基因克隆与序列分析 | 第37-44页 |
| ·大黄鱼Ran基因组织表达谱 | 第44-46页 |
| ·免疫刺激后大黄鱼Ran基因的表达变化 | 第46-50页 |
| ·大黄鱼Ran蛋白原核表达与纯化 | 第50-54页 |
| ·大黄鱼Ran蛋白多克隆抗体制备与检测 | 第54-55页 |
| ·大黄鱼Ran蛋白活性分析和体内组织表达谱 | 第55-56页 |
| ·GST下拉寻找与大黄鱼Ran蛋白相互作用的蛋白及其质谱分析 | 第56-58页 |
| ·大黄鱼MLC基因克隆与序列分析 | 第58-61页 |
| ·大黄鱼MLC蛋白原核表达与纯化 | 第61-64页 |
| ·大黄鱼MLC蛋白多克隆抗体制备 | 第64页 |
| ·大黄鱼Ran蛋白与MLC蛋白相互作用验证 | 第64-65页 |
| ·大黄鱼MLC基因组织表达谱 | 第65-67页 |
| ·免疫刺激后大黄鱼MLC基因的表达变化 | 第67-68页 |
| 4 讨论 | 第68-70页 |
| 第三章 Rab分子特征和功能研究 | 第70-95页 |
| 1 材料 | 第70-71页 |
| ·实验动物 | 第70页 |
| ·菌株与质粒 | 第70页 |
| ·主要药品与试剂 | 第70页 |
| ·引物 | 第70-71页 |
| 2 实验方法 | 第71页 |
| 3 结果与分析 | 第71-93页 |
| ·大黄鱼Rab基因克隆与序列分析 | 第71-79页 |
| ·大黄鱼Rab基因组织表达谱 | 第79-80页 |
| ·免疫刺激后大黄鱼Rab基因的表达变化 | 第80-83页 |
| ·大黄鱼Rab蛋白原核表达与纯化 | 第83-85页 |
| ·大黄鱼Rab蛋白多克隆抗体制备 | 第85页 |
| ·大黄鱼Rab蛋白活性分析及其在体内的组织表达谱 | 第85-86页 |
| ·GST下拉寻找与大黄鱼Rab蛋白相互作用的蛋白与质谱分析 | 第86-88页 |
| ·大黄鱼Actin基因原核克隆 | 第88-90页 |
| ·大黄鱼Actin蛋白表达和纯化 | 第90-91页 |
| ·大黄鱼Actin蛋白多克隆抗体制备 | 第91页 |
| ·大黄鱼Rab蛋白与Actin蛋白相互作用验证 | 第91-93页 |
| 4 讨论 | 第93-95页 |
| 第四章 Rac分子特征和功能研究 | 第95-116页 |
| 1 材料 | 第95-96页 |
| ·实验动物 | 第95页 |
| ·菌株与质粒 | 第95页 |
| ·主要药品与试剂 | 第95页 |
| ·引物 | 第95-96页 |
| 2 实验方法 | 第96页 |
| 3 结果与分析 | 第96-115页 |
| ·大黄鱼Rac基因克隆与序列分析 | 第96-101页 |
| ·大黄鱼Rac基因组织表达谱 | 第101-102页 |
| ·免疫刺激后大黄鱼Rac基因的表达变化 | 第102-104页 |
| ·大黄鱼Rac蛋白原核表达与纯化 | 第104-107页 |
| ·大黄鱼Rac蛋白多克隆抗体制备 | 第107页 |
| ·大黄鱼Rac蛋白活性分析和在体内的组织表达谱 | 第107-109页 |
| ·GST下拉寻找与大黄鱼Rac蛋白相互作用的蛋白与质谱分析 | 第109-110页 |
| ·大黄鱼TPM基因原核克隆 | 第110-112页 |
| ·大黄鱼TPM蛋白表达和纯化 | 第112-113页 |
| ·大黄鱼TPM蛋白多克隆抗体制备 | 第113页 |
| ·大黄鱼Rac蛋白与TPM蛋白相互作用验证 | 第113-115页 |
| 4 讨论 | 第115-116页 |
| 第五章 总结 | 第116-118页 |
| 1 研究结论 | 第116页 |
| 2 研究创新 | 第116-117页 |
| 3 展望 | 第117-118页 |
| 参考文献 | 第118-129页 |
| 致谢 | 第129-130页 |
| 作者简历 | 第130-132页 |
