| 摘要 | 第1-5页 |
| Abstract | 第5-8页 |
| 缩略词表 | 第8-14页 |
| 第一章 文献综述 | 第14-42页 |
| 1 植物的抗寒研究进展 | 第14-28页 |
| ·植物低温伤害的机制 | 第14-16页 |
| ·植物低温伤害的类型 | 第14-15页 |
| ·低温引起植物损伤的主要原因 | 第15-16页 |
| ·植物的抗寒生理生化研究 | 第16-20页 |
| ·低温对光合作用的影响 | 第16页 |
| ·对呼吸作用的影响 | 第16-17页 |
| ·对原生质流动性的影响 | 第17页 |
| ·对渗透调节物质的影响 | 第17-19页 |
| ·对内源激素的影响 | 第19-20页 |
| ·植物抗寒分子机理研究 | 第20-24页 |
| ·低温感应器 | 第20-21页 |
| ·植物的冷信号传导器 | 第21页 |
| ·转录的级联反应 | 第21-23页 |
| ·低温信号在抗寒和冷敏植物中的比较 | 第23页 |
| ·低温胁迫与其他非生物胁迫的交叉 | 第23-24页 |
| ·植物抗寒育种研究 | 第24-28页 |
| ·杂交育种 | 第24-25页 |
| ·诱变育种 | 第25页 |
| ·分子育种 | 第25-28页 |
| 2 香蕉的转基因研究进展 | 第28-34页 |
| ·受体材料的选择 | 第28-29页 |
| ·转基因方法 | 第29-33页 |
| ·粒子轰击法 | 第30页 |
| ·农杆菌介导法 | 第30-33页 |
| ·电击法 | 第33页 |
| ·其他改进的方法 | 第33页 |
| ·高效再生体系的建立 | 第33-34页 |
| 3 拟南芥CBF家族与植物抗冷冻性 | 第34-39页 |
| ·拟南芥CBF基因家族 | 第35-37页 |
| ·CBF基因的克隆 | 第35页 |
| ·CBF基因的结构特征 | 第35-36页 |
| ·CBF转录因子的表达调控特性 | 第36-37页 |
| ·CBF基因抗逆作用机制 | 第37页 |
| ·CBF转基因研究 | 第37-39页 |
| ·粮食作物 | 第37-38页 |
| ·经济作物和林木 | 第38页 |
| ·园艺植物 | 第38-39页 |
| ·草类植物 | 第39页 |
| 4 本研究的目的和意义 | 第39-41页 |
| 5 技术路线 | 第41-42页 |
| 第二章 夫人指蕉和大蕉胚性细胞悬浮系的建立及其植株再生 | 第42-48页 |
| 1 材料与方法 | 第42-44页 |
| ·材料 | 第42页 |
| ·方法 | 第42-44页 |
| ·外植体的选择与处理 | 第42-43页 |
| ·愈伤组织的诱导、胚性愈伤组织的选择和继代培养 | 第43页 |
| ·胚性悬浮诱导 | 第43页 |
| ·体细胞胚的诱导和成熟 | 第43页 |
| ·胚的萌发及生根 | 第43-44页 |
| ·培养条件 | 第44页 |
| 2 结果与分析 | 第44-47页 |
| ·胚性悬浮细胞的获得 | 第44-45页 |
| ·胚性悬浮细胞途径植株再生体系的建立 | 第45-47页 |
| 3 讨论 | 第47页 |
| 4 小结 | 第47-48页 |
| 第三章 拟南芥CBF1基因对香蕉的转化 | 第48-66页 |
| 第一节 拟南芥CBF1基因对大蕉的转化 | 第48-61页 |
| 1 材料与方法 | 第48-55页 |
| ·材料 | 第48页 |
| ·主要培养基配方 | 第48-49页 |
| ·ATCBF1基因植物表达载体的构建 | 第49-52页 |
| ·ATCBF1基因的克隆 | 第49-50页 |
| ·植物表达载体P1301-CBF1的构建 | 第50-51页 |
| ·P1301-CBF1质粒转化农杆菌 | 第51-52页 |
| ·ATCBF1基因对大蕉的转化 | 第52页 |
| ·侵染和共培养 | 第52页 |
| ·抗性胚的筛选 | 第52页 |
| ·抗性胚萌发与植株再生 | 第52页 |
| ·转基因植株的验证 | 第52-55页 |
| ·GUS染色鉴定 | 第52页 |
| ·PCR鉴定 | 第52-53页 |
| ·RT-PCR鉴定 | 第53-54页 |
| ·QRT-PCR鉴定 | 第54-55页 |
| ·转基因植株的形态特征观测 | 第55页 |
| 2 结果与分析 | 第55-59页 |
| ·A7CBF1基因的克隆 | 第55页 |
| ·ATCBF1基因植物表达载体的构建 | 第55-56页 |
| ·转ATCBF1基因大蕉植株的获得及GUS染色鉴定 | 第56-57页 |
| ·外源基因ATCBF1的表达分析 | 第57-58页 |
| ·RT-PCR的检测结果 | 第57-58页 |
| ·QRT-PCR的检测结果 | 第58页 |
| ·转基因大蕉的形态观测 | 第58-59页 |
| 3 讨论 | 第59-61页 |
| 第二节 拟南芥CBF1基因对夫人指蕉的转化 | 第61-66页 |
| 1 材料与方法 | 第61页 |
| 2 结果与分析 | 第61-64页 |
| ·ATCBF1基因的克隆及其植物表达载体的构建 | 第61页 |
| ·转基因植株的转化、筛选、再生和GUS染色 | 第61-62页 |
| ·PCR检测 | 第62-63页 |
| ·ATCBF1基因的表达分析 | 第63-64页 |
| ·RT-PCR检测 | 第63页 |
| ·定量RT-PCR检测 | 第63-64页 |
| ·转基因植株的形态观测 | 第64页 |
| 3 讨论 | 第64-65页 |
| 4 小结 | 第65-66页 |
| 第四章 转ATCBF1基因香蕉的抗寒性检测 | 第66-81页 |
| 第一节 转基因大蕉的抗寒性检测 | 第66-76页 |
| 1 材料与方法 | 第66-70页 |
| ·材料 | 第66页 |
| ·低温处理方法 | 第66页 |
| ·抗寒生理生化指标的测定 | 第66-70页 |
| ·离子渗漏率的测定 | 第66-67页 |
| ·丙二醛(MDA)的测定 | 第67页 |
| ·SOD酶活性测定 | 第67-68页 |
| ·脯氨酸含量的测定 | 第68-69页 |
| ·可溶性糖的测定 | 第69页 |
| ·相对含水量的测定 | 第69-70页 |
| ·数据分析 | 第70页 |
| 2 结果与分析 | 第70-74页 |
| ·离子渗漏率的测定 | 第70页 |
| ·丙二醛(MDA)含量的测定 | 第70-71页 |
| ·超氧化物歧化酶(SOD)的总活性测定 | 第71页 |
| ·游离脯氨酸含量测定 | 第71-72页 |
| ·可容性多糖测定 | 第72页 |
| ·相对含水量的测定 | 第72-73页 |
| ·转基因大蕉植株的抗冷性检测 | 第73-74页 |
| 3 讨论 | 第74-76页 |
| 第二节 转基因夫人指蕉的抗寒性检测 | 第76-81页 |
| 1 材料与方法 | 第76页 |
| ·材料 | 第76页 |
| ·低温处理方法 | 第76页 |
| ·抗寒生理生化指标的测定 | 第76页 |
| 2 结果与分析 | 第76-80页 |
| ·离子渗漏率的测定 | 第76-77页 |
| ·MDA的测定 | 第77页 |
| ·游离脯氨酸的测定 | 第77-78页 |
| ·可溶性糖的测定 | 第78页 |
| ·相对含水量的测定 | 第78-79页 |
| ·转基因夫人指蕉的抗冷性检测 | 第79-80页 |
| 3 小结 | 第80-81页 |
| 第五章 转ATCBF1基因大蕉抗寒基因的克隆 | 第81-96页 |
| 1 材料与方法 | 第81-90页 |
| ·试验材料 | 第81页 |
| ·试验方法 | 第81页 |
| ·总RNA抽提 | 第81页 |
| ·抑制性差减杂交 | 第81-90页 |
| ·第一链cDNA的合成 | 第81-82页 |
| ·双链cDNA(DS cDNA)的合成 | 第82-84页 |
| ·Ds cDNA RSAⅠ酶消化 | 第84-85页 |
| ·RASⅠ酶切产物的纯化 | 第85页 |
| ·接头连接 | 第85-86页 |
| ·消减杂交 | 第86-87页 |
| ·PCR扩增 | 第87-89页 |
| ·PCR产物纯化 | 第89页 |
| ·克隆转化 | 第89-90页 |
| ·阳性克隆测序 | 第90页 |
| ·生物信息学分析 | 第90页 |
| ·基因的表达分析 | 第90页 |
| 2 结果与分析 | 第90-93页 |
| ·总RNA的提取 | 第90-91页 |
| ·Ds DNA的纯化 | 第91页 |
| ·Ds cDNA合成及其RSAⅠ酶切消化 | 第91页 |
| ·抑制性PCR扩增结果 | 第91-92页 |
| ·阳性克隆的检测 | 第92页 |
| ·序列对比结果 | 第92-93页 |
| ·CLP基因的表达分析 | 第93页 |
| 3 讨论 | 第93-95页 |
| 4 小结 | 第95-96页 |
| 结论 | 第96-98页 |
| 论文创新点 | 第98-99页 |
| 下一步工作设想 | 第99-100页 |
| 参考文献 | 第100-122页 |
| 附录 | 第122-123页 |
| 致谢 | 第123-124页 |
| 个人简历 | 第124页 |