| 摘要 | 第1-6页 |
| ABSTRACT | 第6-10页 |
| 中英文縮略表 | 第10-17页 |
| 第1章 引言 | 第17-26页 |
| ·心肌IRI的分子事件 | 第17-18页 |
| ·IPC的心肌保护作用 | 第18-19页 |
| ·IPost心肌保护作用 | 第19-21页 |
| ·PI3K/Akt信号转导与心肌保护作用 | 第21页 |
| ·JAK/Stat信号转导与心肌保护 | 第21-22页 |
| ·Notch信号通路概述及在心脏中的功能 | 第22-23页 |
| ·Notch1信号与PI3K/Akt、JAK/Stat相互整合参与缺血心肌保护 | 第23-25页 |
| ·以PI3K/Akt、JAK/Stat为切入点,研究Notch信号通路的心肌保护机制 | 第25-26页 |
| 第2章 大鼠N1ICD慢病毒表达及干扰载体构建 | 第26-44页 |
| ·材料 | 第26-30页 |
| ·细胞及菌株 | 第26页 |
| ·大鼠cDNA文库及慢病毒载体系统 | 第26-27页 |
| ·主要试剂 | 第27-28页 |
| ·主要仪器 | 第28页 |
| ·引物设计与合成 | 第28-29页 |
| ·干扰片段设计与合成 | 第29-30页 |
| ·方法 | 第30-35页 |
| ·N1ICD扩增 | 第30页 |
| ·构建pGC-FU-N1ICD-3Flag重组质粒 | 第30-31页 |
| ·pGC-FU-N1ICD-3Flag重组质粒功能鉴定 | 第31页 |
| ·GVC112-N1ICD-shRNA干扰质粒构建 | 第31-32页 |
| ·GVC112-N1ICD-shRNA干扰质粒筛选 | 第32页 |
| ·N1ICD及N1ICD-shRNA慢病毒包装与浓缩 | 第32-33页 |
| ·LV-N1ICD及LV-N1ICD-shRNA滴度测定 | 第33-35页 |
| ·统计学分析 | 第35页 |
| ·结果 | 第35-41页 |
| ·大鼠源性N1ICD顺利扩增 | 第35-36页 |
| ·pGC-FU-N1ICD-3Flag重组质粒成功构建 | 第36-37页 |
| ·pGC-FU-N1ICD-3Flag重组质粒在细胞内正常表达 | 第37-38页 |
| ·GVC112-N1ICD-shRNA干扰质粒成功构建 | 第38页 |
| ·GVC112-N1ICD-shRNA干扰质粒顺利筛选 | 第38-39页 |
| ·LV-N1ICD、LV-N1ICD-shRNA滴度测定 | 第39-41页 |
| ·讨论 | 第41-44页 |
| ·Notch信号通路的激动剂和拮抗剂 | 第41页 |
| ·Notch分子结构及N1ICD定位 | 第41-42页 |
| ·病毒载体选择 | 第42页 |
| ·病毒载体构建策略 | 第42-44页 |
| 第3章 Notch1激活PI3K/Akt、JAK/Stat3信号通路,发挥内源性心肌保护作用 | 第44-74页 |
| ·材料 | 第44-46页 |
| ·细胞 | 第44页 |
| ·主要试剂 | 第44-46页 |
| ·主要仪器 | 第46页 |
| ·方法 | 第46-52页 |
| ·H9c2心肌细胞培养及实验分组 | 第46页 |
| ·H9c2心肌细胞慢病毒感染 | 第46-47页 |
| ·调制气体混配器 | 第47页 |
| ·H/R、IPC、IPost体外模型液体配置 | 第47-48页 |
| ·H/R、IPC、IPost体外模型构建 | 第48-49页 |
| ·细胞增殖检测 | 第49页 |
| ·细胞凋亡检测 | 第49页 |
| ·细胞内ROS检测 | 第49-50页 |
| ·ΔΨm检测 | 第50页 |
| ·线粒体分离 | 第50-51页 |
| ·Western blotting检测 | 第51-52页 |
| ·统计学分析 | 第52页 |
| ·结果 | 第52-69页 |
| ·LV-N1ICD及LV-N1ICD-shRNA在心肌细胞中的生物学效应 | 第52-55页 |
| ·Notch1信号通路在心肌细胞缺氧损伤中激活 | 第55-56页 |
| ·Notch1信号通路在心肌细胞H/R、IPC、IPost中激活 | 第56-58页 |
| ·激活Notch1信号提高缺血后心肌细胞活力 | 第58-59页 |
| ·激活Notch1信号通路降低缺血后心肌细胞凋亡 | 第59-61页 |
| ·激活Notch1信号减少缺血后心肌细胞内ROS形成 | 第61-63页 |
| ·激活Notch1信号可稳定缺血后心肌细胞△Ψm | 第63-64页 |
| ·Notch1抑制mPTP开放 | 第64页 |
| ·Notch1调节心肌凋亡蛋白表达 | 第64-65页 |
| ·Notch1激活PI3K/Akt信号通路 | 第65-67页 |
| ·Notch1激活JAK/Stat3信号通路 | 第67-69页 |
| ·讨论 | 第69-74页 |
| ·Notch信号通路在心肌缺血中的激活 | 第69页 |
| ·Notch1信号对缺血心肌的保护 | 第69-70页 |
| ·Notch1抑制mPTP开放,发挥心肌保护效应 | 第70-71页 |
| ·Notch1调控心肌凋亡相关蛋白表达 | 第71-72页 |
| ·Notch1与PI3K/Akt信号通路相互整合,发挥心肌保护效应 | 第72-73页 |
| ·Notch1信号与Stat3相互整合,发挥心肌保护效应 | 第73-74页 |
| 第4章 Notch1信号改善心肌缺血后的心功能 | 第74-88页 |
| ·材料 | 第74-75页 |
| ·动物 | 第74页 |
| ·主要试剂 | 第74-75页 |
| ·主要仪器 | 第75页 |
| ·方法 | 第75-79页 |
| ·Sprague Dawley大鼠慢病毒感染 | 第75页 |
| ·Pentobarbital配制 | 第75-76页 |
| ·Krebs-Henseleit buffer配置 | 第76页 |
| ·Langendorff大鼠离体心脏灌注模型构建 | 第76-77页 |
| ·Langendorff离体心脏Control、I/R、IPC、IPost灌注模型构建 | 第77-78页 |
| ·IS检测 | 第78页 |
| ·LDH检测 | 第78页 |
| ·组织蛋白提取 | 第78-79页 |
| ·Western blotting检测 | 第79页 |
| ·统计学分析 | 第79页 |
| ·结果 | 第79-86页 |
| ·LV-N1ICD及LV-N1ICD-shRNA在大鼠内的生物学效应 | 第79-80页 |
| ·Notch1信号改善大鼠离体心脏缺血后血流动力学 | 第80-83页 |
| ·Notch1信号对大鼠离体心脏LDH的影响 | 第83-84页 |
| ·Notch1信号对大鼠离体心脏IS的影响 | 第84-86页 |
| ·讨论 | 第86-88页 |
| ·Langendorff离体心脏灌注模型在IHD中的研究意义 | 第86页 |
| ·Notch1信号通路改善I/R后心功能 | 第86-88页 |
| 第5章 结论与展望 | 第88-89页 |
| ·结论 | 第88页 |
| ·展望 | 第88-89页 |
| 致谢 | 第89-90页 |
| 参考文献 | 第90-101页 |
| 攻读学位期间的研究成果 | 第101-102页 |
| 综述 | 第102-113页 |
| 参考文献 | 第109-113页 |
