| 摘要 | 第1-6页 |
| ABSTRACT | 第6-17页 |
| 引言 | 第17-23页 |
| 第一部分 稳定低表达WFDC2的人卵巢浆液性癌细胞株SKOV3的构建 | 第23-40页 |
| 1 前言 | 第23-24页 |
| 2 材料与方法 | 第24-35页 |
| ·细胞系和慢病毒载体 | 第24-25页 |
| ·主要试剂和抗体 | 第25-26页 |
| ·主要仪器 | 第26页 |
| ·主要试剂的配制 | 第26-27页 |
| ·实验方法 | 第27-31页 |
| ·感染细胞并筛选稳定株 | 第31-32页 |
| ·细胞总RNA,总蛋白提取及鉴定 | 第32-33页 |
| ·RT-PCR测定各组SKOV3中WFDC2 mRNA的表达 | 第33-34页 |
| ·细胞总蛋白的提取及样品蛋白浓度的测定 | 第34-35页 |
| ·统计学分析 | 第35页 |
| 3. 结果 | 第35-39页 |
| ·卵巢癌SKOV3细胞株形态学观察 | 第35页 |
| ·WFDC2shRNA慢病毒载体的构建、鉴定及外源靶选 | 第35-37页 |
| ·慢病毒转染后稳定株的筛选 | 第37-39页 |
| 4. 讨论 | 第39页 |
| 5. 结论 | 第39-40页 |
| 第二部分 WFDC2基因沉默对人卵巢浆液性癌细胞株SKOV3生物学行为的影响和初步机制研究 | 第40-64页 |
| 1 前言 | 第40-41页 |
| 2 材料与方法 | 第41-45页 |
| ·主要试剂 | 第41页 |
| ·实验方法 | 第41-45页 |
| ·统计学分析 | 第45页 |
| 3. 结果 | 第45-59页 |
| ·增殖能力、PCNA蛋白检测 | 第45-47页 |
| ·Annexin V/PI法测定的细胞凋亡 | 第47-50页 |
| ·细胞用期检測和cyclinDI变化 | 第50-52页 |
| ·Transwell检测肿瘤细胞侵袭能力 | 第52-54页 |
| ·划痕法和Transwell检测肿瘤细胞迁移能力 | 第54-57页 |
| ·Westernblot检测EGFR通路相关蛋白和MMP-9、MMP-2蛋白的表达 | 第57-59页 |
| 4 讨论 | 第59-63页 |
| ·细胞增殖和细胞周期 | 第60-61页 |
| ·凋亡 | 第61-62页 |
| ·侵袭和转移 | 第62页 |
| ·实验的特色与创新之处 | 第62-63页 |
| ·实验的不足与展望 | 第63页 |
| 5. 结论 | 第63-64页 |
| 第三部分 WFDC2基因沉默对裸鼠卵巢癌皮下移植瘤生长及转移的影响 | 第64-85页 |
| 1 前言 | 第64-66页 |
| 2 材料与方法 | 第66-70页 |
| ·实验动物和细胞株 | 第66页 |
| ·主要仪器设备、试剂 | 第66-67页 |
| ·主要试剂 | 第67页 |
| ·建立实体瘤动物模型 | 第67-69页 |
| ·实体瘤动物模型肿瘤生长情况的记录 | 第69页 |
| ·组织HE染色和免疫组化比较HE4、PCNA、LMVD的表达 | 第69页 |
| ·统计学分析 | 第69-70页 |
| 3 结果 | 第70-83页 |
| ·细胞悬液接种成瘤 | 第70-73页 |
| ·组织块移植成瘤的生长曲线 | 第73-76页 |
| ·实验终点时观察裸鼠肿瘤的体积和重量 | 第76-78页 |
| ·转移情况 | 第78页 |
| ·瘤体HE4蛋白的免疫组化 | 第78-79页 |
| ·瘤体PCNA蛋白的免疫组化 | 第79-81页 |
| ·微淋巴管的密度 | 第81-82页 |
| ·免疫组化结果的相关性分析 | 第82-83页 |
| 4 讨论 | 第83-84页 |
| ·对肿瘤增殖、生长的影响 | 第83页 |
| ·对侵袭和转移的影响 | 第83页 |
| ·实验的特色与创新之处 | 第83-84页 |
| ·实验的不足与展望 | 第84页 |
| 5 结论 | 第84-85页 |
| 第四部分 从蛋白水平探讨HE4和基质金属蛋白酶的相互作用 | 第85-98页 |
| 1 前言 | 第85-87页 |
| 2 材料与方法 | 第87-90页 |
| ·主要试剂和抗体 | 第87页 |
| ·液体的配置如下 | 第87页 |
| ·主要仪器 | 第87-88页 |
| ·实验方法 | 第88-90页 |
| 3. 结果 | 第90-94页 |
| ·免疫共沉淀免疫共沉淀(Co-Immunoprecipitation,Co-IP)证实HE4和MMP9.MMP2的结合 | 第90-91页 |
| ·基质金属蛋白酶(MMP)明胶酶谱法(gelatin zymography)测定HE4对MMP9、MMP2功能的影响 | 第91-92页 |
| ·底物裂解法测定HE4对MMP9.MMP2的酶活性抑制率 | 第92-94页 |
| 4 讨论 | 第94-97页 |
| ·本研究的发现 | 第94-95页 |
| ·本研究基础上的推论和思考 | 第95-97页 |
| ·实验的特色与创新之处 | 第97页 |
| ·实验的不足与展望 | 第97页 |
| 5 结论 | 第97-98页 |
| 第五部分 HE4在低级别和高级别浆液性癌的表达差异 | 第98-111页 |
| 1 前言 | 第98-101页 |
| 2 材料与方法 | 第101-102页 |
| ·组织标本 | 第101页 |
| ·主要试剂和抗体 | 第101页 |
| ·免疫组织化学染色 | 第101页 |
| ·结果判定 | 第101-102页 |
| ·统计学分析 | 第102页 |
| 3 结果 | 第102-107页 |
| ·分级情况 | 第102-104页 |
| ·HE4免疫组化结果 | 第104-105页 |
| ·血清HE4、CA125水平在LGSC和HGSC中的差异 | 第105-106页 |
| ·FIGO分期为(Ⅰ+Ⅱ)期病例中,血清HE4、CA125水平在HGSC、LGSC中的差异 | 第106-107页 |
| 4 讨论 | 第107-110页 |
| ·目前文献提示HE4早期诊断卵巢癌的价值,但有必要重新论证 | 第107-108页 |
| ·我们的发现和对以后研究的启示 | 第108-109页 |
| ·实验的特色与创新之处 | 第109页 |
| ·实验的不足与展望 | 第109-110页 |
| 5. 结论 | 第110-111页 |
| 全文总结 | 第111-114页 |
| 致谢 | 第114-115页 |
| 参考文献 | 第115-122页 |
| 攻读学位期间的研究成果 | 第122-123页 |
| 综述(一) | 第123-138页 |
| 参考文献 | 第132-135页 |
| 附图表 | 第135-138页 |
| 综述(二) | 第138-149页 |
| 参考文献 | 第146-149页 |
