西农萨能羊乙酰/丙二酸单酰转移酶基因的原核表达、纯化、活性检测及多克隆抗体制备
| 摘要 | 第1-7页 |
| ABSTRACT | 第7-12页 |
| 第一章 文献综述 | 第12-26页 |
| ·羊奶脂肪酸组成及其营养价值 | 第12-13页 |
| ·乳腺脂肪酸的合成机制 | 第13-14页 |
| ·脂肪酸合酶的研究进展及对脂肪酸碳链长度的控制 | 第14-17页 |
| ·脂肪酸合酶的研究进展 | 第14-15页 |
| ·硫酯酶Ⅱ与中链脂肪酸的形成 | 第15-16页 |
| ·短链脂肪酸的从头合成 | 第16-17页 |
| ·MAT的研究进展 | 第17-19页 |
| ·多克隆抗体技术 | 第19-25页 |
| ·抗体研究概况 | 第19页 |
| ·抗体的结构与功能 | 第19-21页 |
| ·多克隆抗体的制备 | 第21-24页 |
| ·多克隆抗体与单克隆抗体的比较 | 第24-25页 |
| ·本研究的目的及意义 | 第25-26页 |
| 第二章 MAT基因原核表达载体的构建及初步表达 | 第26-37页 |
| ·实验材料 | 第26-28页 |
| ·主要仪器和试剂 | 第26页 |
| ·菌株和质粒 | 第26页 |
| ·主要溶液的配制 | 第26-28页 |
| ·实验方法 | 第28-33页 |
| ·MAT基因的获得 | 第28-30页 |
| ·原核表达载体的构建及鉴定 | 第30-31页 |
| ·pET32a(+)-MAT重组蛋白的诱导表达 | 第31-32页 |
| ·重组蛋白的Western blot鉴定 | 第32-33页 |
| ·结果与分析 | 第33-35页 |
| ·MAT基因的克隆 | 第33-34页 |
| ·原核表达载体的构建及鉴定 | 第34页 |
| ·重组蛋白的诱导表达及鉴定 | 第34-35页 |
| ·讨论 | 第35-36页 |
| ·表达载体及菌株的选择 | 第35-36页 |
| ·蛋白质分子量与预测值偏差 | 第36页 |
| ·小结 | 第36-37页 |
| 第三章 融合蛋白表达条件的优化、纯化及活性测定 | 第37-48页 |
| ·材料 | 第37-38页 |
| ·主要仪器和试剂 | 第37页 |
| ·主要溶液的配制 | 第37-38页 |
| ·方法 | 第38-41页 |
| ·融合蛋白表达条件的优化 | 第38-39页 |
| ·融合蛋白的大量表达及亲和纯化 | 第39-40页 |
| ·目的蛋白的透析复性 | 第40页 |
| ·酶促反应 | 第40页 |
| ·蛋白浓度测定 | 第40-41页 |
| ·结果与分析 | 第41-45页 |
| ·表达条件的优化 | 第41-42页 |
| ·目的蛋白的存在形式 | 第42-43页 |
| ·目的蛋白的亲和纯化及浓度测定 | 第43-44页 |
| ·MAT的活性检测 | 第44-45页 |
| ·讨论 | 第45-47页 |
| ·重组蛋白包涵体的形成 | 第45-46页 |
| ·蛋白质的复性 | 第46页 |
| ·复性的MAT具有转移酶活性 | 第46-47页 |
| ·小结 | 第47-48页 |
| 第四章 MAT多克隆抗体的制备及鉴定 | 第48-55页 |
| ·材料 | 第48-49页 |
| ·试剂和仪器 | 第48页 |
| ·细胞 | 第48页 |
| ·实验动物 | 第48页 |
| ·主要溶液的配制 | 第48-49页 |
| ·方法 | 第49-51页 |
| ·乳化抗原 | 第49页 |
| ·免疫家兔 | 第49页 |
| ·检测抗体效价 | 第49-50页 |
| ·抗体特异性检测 | 第50-51页 |
| ·结果与分析 | 第51-53页 |
| ·抗体效价检测 | 第51-52页 |
| ·抗体特异性分析 | 第52-53页 |
| ·讨论 | 第53-54页 |
| ·免疫佐剂的使用 | 第53页 |
| ·免疫剂量、途径和时间 | 第53页 |
| ·制备的抗体具有较好的特异性 | 第53-54页 |
| ·小结 | 第54-55页 |
| 结论 | 第55-56页 |
| 参考文献 | 第56-62页 |
| 致谢 | 第62-63页 |
| 作者简介 | 第63页 |
