| 摘要 | 第1-3页 |
| Summary | 第3-5页 |
| 缩略词表 | 第5-9页 |
| Ⅰ 文献综述 | 第9-27页 |
| 1 高等植物启动子研究 | 第12-18页 |
| ·植物启动子的结构 | 第12-13页 |
| ·转录起始位点 | 第12页 |
| ·TATA-box | 第12页 |
| ·CAAT-box | 第12-13页 |
| ·GC-box | 第13页 |
| ·特有的上游元件 | 第13页 |
| ·组成型启动子 | 第13-14页 |
| ·CaMV35S 启动子 | 第13页 |
| ·Nos 和 Ocs 启动子 | 第13-14页 |
| ·Act1 启动子 | 第14页 |
| ·Ubiquitin 启动子 | 第14页 |
| ·CsVMV 启动子 | 第14页 |
| ·诱导型启动子 | 第14-16页 |
| ·光诱导启动子 | 第14-15页 |
| ·伤诱导启动子 | 第15页 |
| ·植物激素诱导启动子 | 第15-16页 |
| ·温度诱导启动子 | 第16页 |
| ·组织特异性启动子 | 第16-18页 |
| ·根特异启动子 | 第16页 |
| ·韧皮部特异表达启动子 | 第16-17页 |
| ·维管束特异表达启动子 | 第17页 |
| ·叶片表达启动子 | 第17页 |
| ·花特异表达启动子 | 第17页 |
| ·果实特异表达启动子 | 第17页 |
| ·种子特异表达启动子 | 第17-18页 |
| 2 功能基因侧翼序列克隆方法 | 第18-22页 |
| ·基因组文库筛选法 | 第18页 |
| ·启动子探针载体筛选法 | 第18-19页 |
| ·连接成环 PCR | 第19页 |
| ·外源接头介导 PCR | 第19-20页 |
| ·双链接头法 | 第19-20页 |
| ·单链接头 | 第20页 |
| ·半随机引物 PCR | 第20-22页 |
| 3 调控序列功能鉴定方法 | 第22-23页 |
| ·启动子缺失突变方法 | 第22-23页 |
| ·单侧缺失突变 | 第22页 |
| ·内部缺失 | 第22页 |
| ·衔接物扫描突变 | 第22-23页 |
| ·定点突变 | 第23页 |
| 4 报告基因研究 | 第23-24页 |
| ·新霉素转移酶(NPT-Ⅱ) | 第23页 |
| ·荧光素酶活性检测 | 第23页 |
| ·GUS 酶活性检测 | 第23-24页 |
| ·绿色荧光蛋白(green fluorescent protein，GFP) | 第24页 |
| 5 本研究的目的和意义 | 第24-26页 |
| 6 研究技术路线 | 第26-27页 |
| Ⅱ 材料与方法 | 第27-41页 |
| 1 材料 | 第27页 |
| ·实验样品 | 第27页 |
| ·菌株与载体 | 第27页 |
| ·主要试剂 | 第27页 |
| ·主要仪器设备 | 第27页 |
| 2 方法 | 第27-41页 |
| ·马铃薯基因组 DNA 的提取 | 第27-28页 |
| ·PCR 引物的设计、合成 | 第28-29页 |
| ·3 个茄啶糖基转移酶基因启动子序列的克隆 | 第29-31页 |
| ·PCR 产物纯化回收 | 第31页 |
| ·连接和转化 | 第31页 |
| ·大肠杆菌 DH5α感受态的制备 | 第31-32页 |
| ·连接产物的转化和蓝白斑筛选 | 第32页 |
| ·碱法提取上述菌落的质粒 | 第32-33页 |
| ·重组质粒的 PCR 鉴定 | 第33-34页 |
| ·3 个茄啶糖基转移酶基因启动子的生物信息学分析 | 第34页 |
| ·sgt2 基因 5′侧翼序列的缺失表达分析 | 第34-41页 |
| ·不同长度 5′侧翼序列片段的扩增 | 第34-35页 |
| ·5′侧翼序列缺失表达载体的构建 | 第35-36页 |
| ·阳性对照实验表达载体 | 第36页 |
| ·农杆菌工程菌的制备 | 第36-38页 |
| ·瞬时表达分析 | 第38页 |
| ·sgt2 全长启动子驱动 gfp 表达的亚细胞定位 | 第38页 |
| ·烟草的遗传转化 | 第38-39页 |
| ·抗性苗的分子检测 | 第39-40页 |
| ·转基因植株的 GUS 染色 | 第40-41页 |
| Ⅲ 结果与分析 | 第41-59页 |
| 1 马铃薯基因组 DNA 的提取 | 第41页 |
| 2 3 个茄啶糖基转移酶基因 5′侧翼序列的克隆 | 第41-42页 |
| 3 蓝白斑筛选 | 第42页 |
| 4 3 个茄啶糖基转移酶基因启动子的测序及生物信息学分析 | 第42-55页 |
| ·sgt1 启动子的生物信息学分析 | 第42-44页 |
| ·sgt2 启动子的生物信息学分析 | 第44-50页 |
| ·同源性分析 | 第44-48页 |
| ·序列的生物信息学分析 | 第48-50页 |
| ·sgt3 启动子的生物信息学分析 | 第50-55页 |
| 5 sgt2 启动子的缺失表达分析 | 第55-59页 |
| ·sgt2 启动子缺失片段的克隆 | 第55页 |
| ·sgt2 启动子缺失表达载体的构建 | 第55页 |
| ·农杆菌转化子的鉴定 | 第55-56页 |
| ·瞬时表达分析 | 第56-57页 |
| ·sgt2 全长启动子驱动 gfp 表达的亚细胞定位 | 第57页 |
| ·烟草的遗传转化 | 第57-59页 |
| ·潮霉素筛选浓度的确定 | 第58页 |
| ·含有不同长度 sgt2 启动子转基因烟草的获得 | 第58-59页 |
| Ⅳ 讨论 | 第59-62页 |
| Ⅴ 结论 | 第62-63页 |
| 附录 | 第63-64页 |
| 参考文献 | 第64-71页 |
| 致谢 | 第71-72页 |
| 作者简介 | 第72-73页 |
| 导师简介 | 第73-75页 |
