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斑马鱼HIF-1α启动子活性分析及LPS和低氧对HIF-1α的诱导表达

摘要第1-8页
Abstract第8-11页
第一章 前言第11-19页
 1 低氧诱导因子研究概况第11-13页
   ·低氧诱导因子1的发现第11页
   ·低氧诱导因子α的家族第11-12页
   ·氧对HIF-1α亚基的调节第12-13页
 2 HIF-1α的功能第13-16页
   ·HIF-1α与新陈代谢适应第13-14页
   ·HIF-1α与胚胎发育第14-15页
   ·HIF-1α炎症反应第15-16页
 3 低氧诱导因子1α在鱼类中的概况第16-17页
 4 本研究的目的与意义第17-19页
第二章 斑马鱼HIF-1α基因启动子的生物信息学分析第19-26页
 1 材料与方法第19-20页
   ·HIF-1α基因启动子序列的获取第19页
   ·DNA片段的启动子预测第19页
   ·DNA片段CpG岛的分析第19-20页
   ·转录起始位点预测第20页
   ·HIF-1α基因5’侧翼序列转录因子结合位点分析第20页
   ·鲤科鱼类HIF-1α基因5’侧翼区序列对应比对第20页
 2 结果第20-24页
   ·启动子序列预测结果第20页
   ·CpG岛预测结果第20-21页
   ·转录起始位点预测结果第21-22页
   ·转录因子结合位点预测结果第22-23页
   ·鲤科鱼类HIF-1α基因5’侧翼区序列对应比对结果第23-24页
 3 讨论第24-26页
第三章 斑马鱼HIF-1α基因启动子缺失突变体的构建与活性分析第26-41页
 1 材料与方法第26-34页
   ·实验材料第26-28页
     ·实验对象第26页
     ·主要试剂及耗材第26-27页
     ·主要仪器设备第27-28页
   ·实验方法第28-34页
     ·斑马鱼基因组DNA的提取第28页
     ·PCR扩增斑马鱼HIF-1α基因5’-侧翼序列片段第28-30页
     ·PCR产物的纯化回收第30页
     ·PCR产物与pGL3-basic的双酶切第30-31页
     ·酶切产物的纯化回收第31页
     ·酶切后目的片段与载体的连接第31页
     ·转化及阳性克隆的鉴定第31-32页
     ·质粒抽提第32-33页
     ·细胞培养第33页
     ·质粒转染第33-34页
     ·双荧光素酶报告基因检测第34页
 2 结果第34-37页
   ·斑马鱼基因组DNA的抽提第34-35页
   ·斑马鱼HIF-1α基因系列截短突变体的5’侧翼序列PCR扩增第35-36页
   ·斑马鱼HIF-1α基因系列5’侧翼序列系列荧光素酶报告基因表达载体的构建、测序及PCR鉴定第36-37页
   ·斑马鱼HIF-1α基因系列5’侧翼序列系列截短缺失体的荧光素酶报告基因表达载体的活性测定第37页
 3. 讨论第37-41页
第四章 LPS及低氧对斑马鱼HIF-1α基因转录水平的调节第41-50页
 1 材料与方法第41-45页
   ·实验材料第41-42页
     ·实验对象第41页
     ·主要试剂及耗材第41-42页
     ·主要实验设备第42页
   ·实验方法第42-45页
     ·质粒转染第42页
     ·细胞样品的处理第42页
     ·双荧光素酶报告基因检测第42页
     ·斑马鱼仔鱼的处理及取样第42-43页
     ·斑马鱼仔鱼总RNA的提取第43-44页
     ·cDNA的合成第44页
     ·斑马鱼HIF-1α基因的荧光定量检测第44-45页
     ·数据统计第45页
 2 结果第45-48页
   ·常氧下LPS处理对HIF-1α系列启动子缺失体活性的影响第45-46页
   ·常氧下LPS处理斑马鱼仔鱼对HIF-1α基因转录水平的影响第46页
   ·低氧和LPS处理斑马鱼仔鱼对HIF-1α基因转录水平的影响第46-48页
 3 讨论第48-50页
参考文献第50-60页
致谢第60页

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