| 摘要 | 第1-8页 |
| Abstract | 第8-11页 |
| 第一章 前言 | 第11-19页 |
| 1 低氧诱导因子研究概况 | 第11-13页 |
| ·低氧诱导因子1的发现 | 第11页 |
| ·低氧诱导因子α的家族 | 第11-12页 |
| ·氧对HIF-1α亚基的调节 | 第12-13页 |
| 2 HIF-1α的功能 | 第13-16页 |
| ·HIF-1α与新陈代谢适应 | 第13-14页 |
| ·HIF-1α与胚胎发育 | 第14-15页 |
| ·HIF-1α炎症反应 | 第15-16页 |
| 3 低氧诱导因子1α在鱼类中的概况 | 第16-17页 |
| 4 本研究的目的与意义 | 第17-19页 |
| 第二章 斑马鱼HIF-1α基因启动子的生物信息学分析 | 第19-26页 |
| 1 材料与方法 | 第19-20页 |
| ·HIF-1α基因启动子序列的获取 | 第19页 |
| ·DNA片段的启动子预测 | 第19页 |
| ·DNA片段CpG岛的分析 | 第19-20页 |
| ·转录起始位点预测 | 第20页 |
| ·HIF-1α基因5’侧翼序列转录因子结合位点分析 | 第20页 |
| ·鲤科鱼类HIF-1α基因5’侧翼区序列对应比对 | 第20页 |
| 2 结果 | 第20-24页 |
| ·启动子序列预测结果 | 第20页 |
| ·CpG岛预测结果 | 第20-21页 |
| ·转录起始位点预测结果 | 第21-22页 |
| ·转录因子结合位点预测结果 | 第22-23页 |
| ·鲤科鱼类HIF-1α基因5’侧翼区序列对应比对结果 | 第23-24页 |
| 3 讨论 | 第24-26页 |
| 第三章 斑马鱼HIF-1α基因启动子缺失突变体的构建与活性分析 | 第26-41页 |
| 1 材料与方法 | 第26-34页 |
| ·实验材料 | 第26-28页 |
| ·实验对象 | 第26页 |
| ·主要试剂及耗材 | 第26-27页 |
| ·主要仪器设备 | 第27-28页 |
| ·实验方法 | 第28-34页 |
| ·斑马鱼基因组DNA的提取 | 第28页 |
| ·PCR扩增斑马鱼HIF-1α基因5’-侧翼序列片段 | 第28-30页 |
| ·PCR产物的纯化回收 | 第30页 |
| ·PCR产物与pGL3-basic的双酶切 | 第30-31页 |
| ·酶切产物的纯化回收 | 第31页 |
| ·酶切后目的片段与载体的连接 | 第31页 |
| ·转化及阳性克隆的鉴定 | 第31-32页 |
| ·质粒抽提 | 第32-33页 |
| ·细胞培养 | 第33页 |
| ·质粒转染 | 第33-34页 |
| ·双荧光素酶报告基因检测 | 第34页 |
| 2 结果 | 第34-37页 |
| ·斑马鱼基因组DNA的抽提 | 第34-35页 |
| ·斑马鱼HIF-1α基因系列截短突变体的5’侧翼序列PCR扩增 | 第35-36页 |
| ·斑马鱼HIF-1α基因系列5’侧翼序列系列荧光素酶报告基因表达载体的构建、测序及PCR鉴定 | 第36-37页 |
| ·斑马鱼HIF-1α基因系列5’侧翼序列系列截短缺失体的荧光素酶报告基因表达载体的活性测定 | 第37页 |
| 3. 讨论 | 第37-41页 |
| 第四章 LPS及低氧对斑马鱼HIF-1α基因转录水平的调节 | 第41-50页 |
| 1 材料与方法 | 第41-45页 |
| ·实验材料 | 第41-42页 |
| ·实验对象 | 第41页 |
| ·主要试剂及耗材 | 第41-42页 |
| ·主要实验设备 | 第42页 |
| ·实验方法 | 第42-45页 |
| ·质粒转染 | 第42页 |
| ·细胞样品的处理 | 第42页 |
| ·双荧光素酶报告基因检测 | 第42页 |
| ·斑马鱼仔鱼的处理及取样 | 第42-43页 |
| ·斑马鱼仔鱼总RNA的提取 | 第43-44页 |
| ·cDNA的合成 | 第44页 |
| ·斑马鱼HIF-1α基因的荧光定量检测 | 第44-45页 |
| ·数据统计 | 第45页 |
| 2 结果 | 第45-48页 |
| ·常氧下LPS处理对HIF-1α系列启动子缺失体活性的影响 | 第45-46页 |
| ·常氧下LPS处理斑马鱼仔鱼对HIF-1α基因转录水平的影响 | 第46页 |
| ·低氧和LPS处理斑马鱼仔鱼对HIF-1α基因转录水平的影响 | 第46-48页 |
| 3 讨论 | 第48-50页 |
| 参考文献 | 第50-60页 |
| 致谢 | 第60页 |
