| 摘要 | 第1-11页 |
| ABSTRACT | 第11-13页 |
| 第一章 绪论 | 第13-27页 |
| ·蛋白酶 K 简介 | 第13-21页 |
| ·蛋白酶 K 的分子结构 | 第13-14页 |
| ·蛋白酶 K 的酶学特性 | 第14-15页 |
| ·蛋白酶 K 分子结构的进化和酶学特性 | 第15-16页 |
| ·蛋白酶 K 的生产 | 第16-17页 |
| ·蛋白酶 K 的应用 | 第17-21页 |
| ·巴斯德毕赤酵母 | 第21-23页 |
| ·巴斯德毕赤酵母的研究利用 | 第21-22页 |
| ·巴斯德毕赤酵母表达载体构建方法 | 第22页 |
| ·巴斯德毕赤酵母表达外源蛋白 | 第22-23页 |
| ·巴斯德毕赤酵母表达菌株的培养条件 | 第23页 |
| ·展望 | 第23页 |
| ·本课题的立题背景和研究内容 | 第23-27页 |
| ·立题背景 | 第23-24页 |
| ·主要研究内容 | 第24-27页 |
| 第2章 蛋白酶 K 基因重组于毕赤酵母中 | 第27-49页 |
| ·引言 | 第27页 |
| ·材料和方法 | 第27-33页 |
| ·实验菌株 | 第27-28页 |
| ·工具酶与试剂盒 | 第28页 |
| ·主要生化试剂 | 第28-29页 |
| ·主要实验仪器 | 第29-30页 |
| ·主要培养基 | 第30-31页 |
| ·试剂的配置方法 | 第31-33页 |
| ·实验方法 | 第33-41页 |
| ·基因设计和序列优化 | 第33-34页 |
| ·DH5α感受态制备及 PUC19-proteinase k 质粒的转化 | 第34页 |
| ·扩大培养 DH5α-PUC19-proteinase k | 第34-35页 |
| ·小量 PUC19-proteinase k 质粒的提取 | 第35页 |
| ·目的片段 proteinase K 与载体 pPIC9K 的酶切 | 第35-36页 |
| ·目的片段的回收 | 第36-37页 |
| ·目的片段与载体 pPIC9K 的链接 | 第37页 |
| ·连接产物的鉴定 | 第37页 |
| ·连接质粒的线性化 | 第37-38页 |
| ·线性化质粒转入 GS115 感受态细胞 | 第38-39页 |
| ·验证目的基因组正确性 | 第39-41页 |
| ·结果与讨论 | 第41-46页 |
| ·蛋白酶 K 基因的设计 | 第41-42页 |
| ·克隆载体与的构建 | 第42-44页 |
| ·pPIC9K-proteinase k 质粒的线性化 | 第44-45页 |
| ·pPIC9K-proteinase k 在 GS115 中重组表达 | 第45-46页 |
| ·本章小结 | 第46-49页 |
| 第三章 蛋白酶 K 在毕赤酵母中的表达与优化 | 第49-65页 |
| ·引言 | 第49页 |
| ·材料和方法 | 第49-53页 |
| ·实验菌株 | 第49-50页 |
| ·工具酶与试剂盒 | 第50页 |
| ·主要生化试剂 | 第50页 |
| ·主要实验仪器 | 第50页 |
| ·主要培养基 | 第50-51页 |
| ·试剂的配置方法 | 第51-53页 |
| ·实验方法 | 第53-56页 |
| ·GS115- pPIC9K-proteinase k 的诱导表达培养 | 第53页 |
| ·SDS-PAGE 电泳 | 第53页 |
| ·蛋白浓度测定 | 第53-55页 |
| ·蛋白酶 K 酶活测定 | 第55-56页 |
| ·结果与讨论 | 第56-63页 |
| ·GS115- pPIC9K-proteinase k 的诱导表达培养 | 第56-57页 |
| ·初始 PH 条件对蛋白酶 K 表达影响 | 第57-58页 |
| ·诱导时机对蛋白酶 K 表达影响 | 第58-59页 |
| ·甲醇添加量对蛋白酶 K 表达的影响 | 第59-60页 |
| ·培养时间对蛋白酶 K 表达的影响 | 第60-61页 |
| ·蛋白酶 K 浓度测定 | 第61-62页 |
| ·蛋白酶 K 酶活的测定 | 第62-63页 |
| ·本章小结 | 第63-65页 |
| 第四章 蛋白酶 K 的纯化与性质测定 | 第65-73页 |
| ·引言 | 第65页 |
| ·实验材料和实验设备 | 第65-66页 |
| ·菌种 | 第65页 |
| ·实验设备 | 第65-66页 |
| ·试剂与溶液 | 第66页 |
| ·实验方法 | 第66-67页 |
| ·蛋白酶 K 的分离纯化 | 第66页 |
| ·纯化后的重组蛋白酶 k 酶活特性 | 第66-67页 |
| ·结果与讨论 | 第67-71页 |
| ·重组蛋白酶 K 的分离纯化 | 第67-69页 |
| ·有机试剂对蛋白酶 K 酶活性质的影响 | 第69页 |
| ·PH 值对蛋白酶 K 酶活力的影响 | 第69-70页 |
| ·温度对重组蛋白酶 K 酶活力的影响 | 第70-71页 |
| ·本章小结 | 第71-73页 |
| 第五章 发酵罐发酵蛋白酶 K | 第73-79页 |
| ·引言 | 第73页 |
| ·材料与方法 | 第73页 |
| ·菌株 | 第73页 |
| ·实验仪器 | 第73页 |
| ·实验试剂 | 第73页 |
| ·实验方法 | 第73-76页 |
| ·发酵参数表 | 第73-75页 |
| ·实验步骤 | 第75-76页 |
| ·结果与讨论 | 第76页 |
| ·本章小结 | 第76-79页 |
| 第六章 结论与展望 | 第79-81页 |
| ·结论 | 第79页 |
| ·展望 | 第79-81页 |
| 参考文献 | 第81-85页 |
| 致谢 | 第85-87页 |
| 在学期间的主要科研成果 | 第87页 |
