| 摘要 | 第1-9页 |
| 文献综述 | 第9-20页 |
| 1 鸡传染性支气管炎病毒分子生物学研究概况 | 第10-11页 |
| ·IBV基因组结构特征 | 第10页 |
| ·IBV主要结构蛋白 | 第10-11页 |
| 2 鸡传染性支气管炎病毒检测技术的研究进展 | 第11-14页 |
| ·中和试验 | 第12页 |
| ·血凝及血凝抑制试验 | 第12页 |
| ·琼脂扩散试验 | 第12页 |
| ·酶联免疫吸附试验 | 第12-13页 |
| ·免疫荧光技术 | 第13页 |
| ·聚合酶链式反应 | 第13页 |
| ·PCR产物的限制性内切酶片段多态性分析 | 第13-14页 |
| ·寡核苷酸序列图谱分析 | 第14页 |
| 3 环等温扩增技术 | 第14-18页 |
| ·LAMP引物设计 | 第14-15页 |
| ·LAMP反应原理 | 第15-18页 |
| 4 T细胞表位及ELIspot技术 | 第18-20页 |
| ·T细胞表位的概述 | 第18页 |
| ·ELIspot技术概述 | 第18-20页 |
| 实验一 鸡传染性支气管炎病毒RT-LAMP检测方法的建立 | 第20-28页 |
| 1 材料 | 第20页 |
| ·病毒 | 第20页 |
| ·主要试剂 | 第20页 |
| 2 方法 | 第20-22页 |
| ·引物设计 | 第20-21页 |
| ·病毒RNA的提取 | 第21页 |
| ·反应条件的优化 | 第21页 |
| ·反应时间的优化 | 第21页 |
| ·灵敏度检测 | 第21-22页 |
| ·特异性检测 | 第22页 |
| ·IBV不同毒株的检测 | 第22页 |
| 3 结果 | 第22-25页 |
| ·RT-LAMP反应条件的优化 | 第22-23页 |
| ·RT-LAMP反应时间的优化 | 第23页 |
| ·灵敏度检测 | 第23-24页 |
| ·RT-LAMP特异性检测 | 第24-25页 |
| ·IBV不同毒株的RT-LAMP检测 | 第25页 |
| 4 讨论 | 第25-28页 |
| 实验二 IBV S1和M蛋白核酸疫苗的构建及鸡免疫保护试验 | 第28-51页 |
| 1 材料 | 第28-29页 |
| ·毒株、细胞、载体 | 第28页 |
| ·实验动物 | 第28页 |
| ·主要试剂 | 第28页 |
| ·主要仪器 | 第28-29页 |
| 2 方法 | 第29-33页 |
| ·M、S1蛋白多克隆抗体的制备 | 第29-30页 |
| ·M、S1蛋白真核表达质粒的构建、体外瞬时表达及表达产物的检测 | 第30-32页 |
| ·免疫保护实验 | 第32-33页 |
| 3 实验结果 | 第33-48页 |
| ·M、S1基因原核表达质粒的构建 | 第33-34页 |
| ·pET 28a-M、pET 28a-S1诱导表达及纯化 | 第34-37页 |
| ·兔抗血清的Western-blot效价检测 | 第37页 |
| ·M、S1蛋白真核表达质粒的构建 | 第37-39页 |
| ·真核表达产物的Western-blot检测 | 第39-40页 |
| ·IFA检测真核表达质粒在体外的表达 | 第40-42页 |
| ·两次免疫后各组的抗体水平测定 | 第42-43页 |
| ·攻毒后排毒量检测 | 第43-46页 |
| ·剖检及病理切片结果 | 第46-48页 |
| 4 讨论 | 第48-51页 |
| 实验三 IBV S1蛋白T细胞表位的筛选 | 第51-59页 |
| 1 材料 | 第51页 |
| ·多肽 | 第51页 |
| ·主要试剂 | 第51页 |
| ·实验动物 | 第51页 |
| ·主要仪器 | 第51页 |
| 2 方法 | 第51-54页 |
| ·多肽的设计 | 第51-52页 |
| ·动物免疫 | 第52-53页 |
| ·鸡脾淋巴细胞的制备 | 第53页 |
| ·IFN-γELIspot方法筛选肽 | 第53-54页 |
| 3 结果 | 第54-57页 |
| 4 讨论 | 第57-59页 |
| 结论 | 第59-60页 |
| 参考文献 | 第60-63页 |
| Abstract | 第63-65页 |
| 英文缩略表 | 第65-67页 |
| 致谢 | 第67-68页 |
