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Myostatin基因突变表达载体的构建及其免疫效果的研究

摘要第1-9页
前言第9-10页
文献综述第10-19页
 1 Myostatin基因的研究进展第10-13页
   ·Myostatin基因的发现第10页
   ·Myostatin基因的分子结构、组织特异性及同源性第10-11页
   ·Myostatin蛋白的合成及生物学特性第11-12页
   ·Myostatin的作用第12页
   ·绵羊、猪Myostatin基因的研究进展第12-13页
 2 基因疫苗的研究进展第13-18页
   ·DNA疫苗的发现和发展历史第14页
   ·基因免疫目的基因的来源第14-15页
   ·基因疫苗表达载体的选择第15-16页
   ·基因免疫中免疫佐剂的选择第16页
   ·基因疫苗的接种途径第16-17页
   ·基因免疫的优点第17-18页
 3 Myostatin基因疫苗的研究进展第18-19页
本试验的研究目的和意义第19-57页
 一、Myostatin基因突变表达载体的构建第20-46页
  1 材料和方法第20-36页
   ·动物材料、菌株和质粒载体第20-21页
   ·分子试验生化试剂第20页
   ·主要仪器第20-21页
   ·缓冲液与常用试剂的配制第21页
   ·引物设计和序列分析软件第21页
   2 基本试验方法第21-36页
   ·猪、绵羊骨骼肌RNA提取、反转录第22页
     ·骨骼肌RNA的提取第22页
     ·RNA反转录产生cDNA第22页
   ·PCR扩增猪、绵羊Myostatin基因序列第22-24页
     ·PCR扩增目的片段引物设计第22-23页
     ·Myostatin目的基因的扩增第23页
     ·PCR的反应过程第23-24页
   ·琼脂糖凝胶电泳第24页
   ·目的片段的琼脂糖凝胶回收第24页
   ·目的片段连接至pEASY-T3载体、转化感受态细胞第24-26页
     ·猪、绵羊Myostatin基因连接至pEASY-T3载体第24-25页
     ·猪Myostatin基因连接至pEASY-T3载体的过程第25页
     ·绵羊Myostatin基因连接至pEASY-T3载体第25页
     ·转化感受态细胞第25-26页
   ·质粒小量提取第26页
   ·质粒进行单酶切鉴定第26页
   ·Myostatin基因ATG前添加kozak序列第26-27页
   ·猪、绵羊Myostatin基因真核表达载体的构建第27-30页
     ·目的片段前添加kozak序列第27页
     ·目的片段与载体的双酶切第27页
     ·将加有kozak序列的Myostatin亚克隆至pVAX载体第27-29页
     ·猪Myostatin基因真核表达载体的构建过程第29-30页
     ·绵羊Myostatin基因真核表达载体的构建过程第30页
   ·猪Myostatin基因突变表达载体的构建第30-36页
     ·Myostatin基因突变表达载体构建第30-32页
     ·猪Myostatin基因突变第一个表达载体的构建第32-34页
     ·猪Myostatin基因第二个突变表达载体的构建第34-36页
  结果与分析第36-43页
   1、猪、绵羊骨骼肌RNA提取第36页
   2、猪、绵羊Myostatin基因cds区的PCR扩增第36-41页
   ·猪、绵羊Myostatin基因cds区的PCR扩增电泳结果第36-37页
   ·猪Myostatin基因PCR扩增测序结果第37-39页
   ·绵羊Myostatin基因PCR扩增测序结果第39-41页
   3、目的片段与pEASY-T3载体的连接及目的片段的亚克隆第41页
   4、猪Myostatin基因突变表达载体构建第41-43页
   ·pVAX-MSTN(T1)载体的构建第41-42页
     ·pVAX-MSTN(T1)载体的双酶切电泳结果第41-42页
     ·pVAX-MSTN (T1 )突变载体的部分测序结果第42页
   ·pVAX-MSTN(T2)的构建第42-43页
     ·pVAX-MSTN(T2)载体的双酶切电泳结果第42-43页
     ·pVAX-MSTN (T2)突变载体的部分测序结果第43页
  讨论第43-45页
  小结第45-46页
 二、猪Myostatin表达载体免疫小鼠第46-57页
  材料与方法第46-51页
   1 试验材料第46-47页
   ·试验动物与试剂第46页
   ·主要仪器第46页
   ·主要试剂第46-47页
   2 基本实验方法第47-51页
   ·质粒大量提取第47-48页
   ·小鼠免疫实验第48-49页
   ·样品的采集与制备第49页
     ·血清的收集第49页
     ·肌肉的采集与固定第49页
   ·ELISA检测抗体第49页
   ·石蜡切片的制备第49-50页
   ·肌肉组织显微结构观察第50页
   ·数据的统计和处理第50-51页
  结果与分析第51-54页
   1、小鼠体重变化第51页
   2、小鼠骨骼肌显微结构的观察第51-52页
   3、ELISA检测小鼠血清Myostatin特异性抗体第52-54页
   ·试验测得标准品和各个试验组OD值结果第52-53页
   ·根据标准品的OD值和浓度值绘制标准曲线第53页
   ·ELISA检测小鼠血清Myostatin特异性抗体浓度第53-54页
  讨论第54-57页
全文结论第57-58页
参考文献第58-65页
Abstract第65-67页
致谢第67页

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