摘要 | 第1-9页 |
前言 | 第9-10页 |
文献综述 | 第10-19页 |
1 Myostatin基因的研究进展 | 第10-13页 |
·Myostatin基因的发现 | 第10页 |
·Myostatin基因的分子结构、组织特异性及同源性 | 第10-11页 |
·Myostatin蛋白的合成及生物学特性 | 第11-12页 |
·Myostatin的作用 | 第12页 |
·绵羊、猪Myostatin基因的研究进展 | 第12-13页 |
2 基因疫苗的研究进展 | 第13-18页 |
·DNA疫苗的发现和发展历史 | 第14页 |
·基因免疫目的基因的来源 | 第14-15页 |
·基因疫苗表达载体的选择 | 第15-16页 |
·基因免疫中免疫佐剂的选择 | 第16页 |
·基因疫苗的接种途径 | 第16-17页 |
·基因免疫的优点 | 第17-18页 |
3 Myostatin基因疫苗的研究进展 | 第18-19页 |
本试验的研究目的和意义 | 第19-57页 |
一、Myostatin基因突变表达载体的构建 | 第20-46页 |
1 材料和方法 | 第20-36页 |
·动物材料、菌株和质粒载体 | 第20-21页 |
·分子试验生化试剂 | 第20页 |
·主要仪器 | 第20-21页 |
·缓冲液与常用试剂的配制 | 第21页 |
·引物设计和序列分析软件 | 第21页 |
2 基本试验方法 | 第21-36页 |
·猪、绵羊骨骼肌RNA提取、反转录 | 第22页 |
·骨骼肌RNA的提取 | 第22页 |
·RNA反转录产生cDNA | 第22页 |
·PCR扩增猪、绵羊Myostatin基因序列 | 第22-24页 |
·PCR扩增目的片段引物设计 | 第22-23页 |
·Myostatin目的基因的扩增 | 第23页 |
·PCR的反应过程 | 第23-24页 |
·琼脂糖凝胶电泳 | 第24页 |
·目的片段的琼脂糖凝胶回收 | 第24页 |
·目的片段连接至pEASY-T3载体、转化感受态细胞 | 第24-26页 |
·猪、绵羊Myostatin基因连接至pEASY-T3载体 | 第24-25页 |
·猪Myostatin基因连接至pEASY-T3载体的过程 | 第25页 |
·绵羊Myostatin基因连接至pEASY-T3载体 | 第25页 |
·转化感受态细胞 | 第25-26页 |
·质粒小量提取 | 第26页 |
·质粒进行单酶切鉴定 | 第26页 |
·Myostatin基因ATG前添加kozak序列 | 第26-27页 |
·猪、绵羊Myostatin基因真核表达载体的构建 | 第27-30页 |
·目的片段前添加kozak序列 | 第27页 |
·目的片段与载体的双酶切 | 第27页 |
·将加有kozak序列的Myostatin亚克隆至pVAX载体 | 第27-29页 |
·猪Myostatin基因真核表达载体的构建过程 | 第29-30页 |
·绵羊Myostatin基因真核表达载体的构建过程 | 第30页 |
·猪Myostatin基因突变表达载体的构建 | 第30-36页 |
·Myostatin基因突变表达载体构建 | 第30-32页 |
·猪Myostatin基因突变第一个表达载体的构建 | 第32-34页 |
·猪Myostatin基因第二个突变表达载体的构建 | 第34-36页 |
结果与分析 | 第36-43页 |
1、猪、绵羊骨骼肌RNA提取 | 第36页 |
2、猪、绵羊Myostatin基因cds区的PCR扩增 | 第36-41页 |
·猪、绵羊Myostatin基因cds区的PCR扩增电泳结果 | 第36-37页 |
·猪Myostatin基因PCR扩增测序结果 | 第37-39页 |
·绵羊Myostatin基因PCR扩增测序结果 | 第39-41页 |
3、目的片段与pEASY-T3载体的连接及目的片段的亚克隆 | 第41页 |
4、猪Myostatin基因突变表达载体构建 | 第41-43页 |
·pVAX-MSTN(T1)载体的构建 | 第41-42页 |
·pVAX-MSTN(T1)载体的双酶切电泳结果 | 第41-42页 |
·pVAX-MSTN (T1 )突变载体的部分测序结果 | 第42页 |
·pVAX-MSTN(T2)的构建 | 第42-43页 |
·pVAX-MSTN(T2)载体的双酶切电泳结果 | 第42-43页 |
·pVAX-MSTN (T2)突变载体的部分测序结果 | 第43页 |
讨论 | 第43-45页 |
小结 | 第45-46页 |
二、猪Myostatin表达载体免疫小鼠 | 第46-57页 |
材料与方法 | 第46-51页 |
1 试验材料 | 第46-47页 |
·试验动物与试剂 | 第46页 |
·主要仪器 | 第46页 |
·主要试剂 | 第46-47页 |
2 基本实验方法 | 第47-51页 |
·质粒大量提取 | 第47-48页 |
·小鼠免疫实验 | 第48-49页 |
·样品的采集与制备 | 第49页 |
·血清的收集 | 第49页 |
·肌肉的采集与固定 | 第49页 |
·ELISA检测抗体 | 第49页 |
·石蜡切片的制备 | 第49-50页 |
·肌肉组织显微结构观察 | 第50页 |
·数据的统计和处理 | 第50-51页 |
结果与分析 | 第51-54页 |
1、小鼠体重变化 | 第51页 |
2、小鼠骨骼肌显微结构的观察 | 第51-52页 |
3、ELISA检测小鼠血清Myostatin特异性抗体 | 第52-54页 |
·试验测得标准品和各个试验组OD值结果 | 第52-53页 |
·根据标准品的OD值和浓度值绘制标准曲线 | 第53页 |
·ELISA检测小鼠血清Myostatin特异性抗体浓度 | 第53-54页 |
讨论 | 第54-57页 |
全文结论 | 第57-58页 |
参考文献 | 第58-65页 |
Abstract | 第65-67页 |
致谢 | 第67页 |