| 摘要 | 第1-6页 |
| Abstract | 第6-9页 |
| 目录 | 第9-12页 |
| 1 前言 | 第12-36页 |
| ·石斛属植物概况 | 第12-13页 |
| ·石斛属植物DNA分子标记研究进展 | 第13-24页 |
| ·常见分子标记及其原理 | 第13-15页 |
| ·限制性片段长度多态性RFLP | 第13-14页 |
| ·随机扩增多态性DNA(RAPD) | 第14页 |
| ·简单重复序列(SSR) | 第14页 |
| ·简单重复序列区间(ISSR) | 第14-15页 |
| ·扩增片段长度多态性(AFLP) | 第15页 |
| ·酶切扩增多态性序列(CAPS) | 第15页 |
| ·分子标记在石斛研究中的应用 | 第15-24页 |
| ·种质资源鉴定研究 | 第15-18页 |
| ·亲缘关系与分类研究 | 第18-20页 |
| ·遗传多样性分析 | 第20-23页 |
| ·遗传图谱的构建 | 第23-24页 |
| · | 第24-29页 |
| ·铁皮石斛概述 | 第24-25页 |
| ·石斛人工授粉研究进展 | 第25-26页 |
| ·石斛组织培养研究进展 | 第26-29页 |
| ·石斛属植物组织培养外植体的选择 | 第26-27页 |
| ·基本培养基成分对石斛属植物组织培养的影响 | 第27-28页 |
| ·植物生长调节剂对石斛属植物组织培养的影响 | 第28页 |
| ·培养环境对石斛属植物组织培养的影响 | 第28-29页 |
| ·ACC氧化酶基因研究进展 | 第29-34页 |
| ·ACC氧化酶基因概述 | 第29-30页 |
| ·国内外研究进展 | 第30-34页 |
| ·乙烯调控苯丙氨酸解氨酶研究进展 | 第30页 |
| ·苯丙氨酸解氨酶与生物总碱变化的研究进展 | 第30-31页 |
| ·ACC氧化酶研究进展 | 第31-34页 |
| ·本研究的立体依据及意义 | 第34-36页 |
| ·石斛属植物亲缘关系的研究 | 第34-35页 |
| ·铁皮石斛人工授粉及组织培养研究 | 第35页 |
| ·ACC氧化酶基因的研究 | 第35-36页 |
| ·研究内容 | 第36页 |
| 2 采用ISSR标记研究石斛属植物的亲缘关系 | 第36-47页 |
| ·材料 | 第36-38页 |
| ·植物材料 | 第36页 |
| ·主要试剂 | 第36页 |
| ·试验仪器 | 第36-37页 |
| ·常用试剂配制 | 第37-38页 |
| ·实验方法 | 第38-41页 |
| ·DNA的提取 | 第38-39页 |
| ·模板DNA样品浓度及质量的测定 | 第39页 |
| ·ISSR-PCR反应 | 第39-41页 |
| ·PCR扩增反应体系优化 | 第39-40页 |
| ·PCR扩增程序 | 第40页 |
| ·引物筛选 | 第40-41页 |
| ·电泳检测扩增产物 | 第41页 |
| ·数据处理 | 第41页 |
| ·谱带记录 | 第41页 |
| ·ISSR标记共享度 | 第41页 |
| ·统计数据 | 第41页 |
| ·结果分析 | 第41-46页 |
| ·DNA提取 | 第41-42页 |
| ·引物筛选 | 第42页 |
| ·ISSR反应体系及反应程序的优化 | 第42-43页 |
| ·PCR结果 | 第43-45页 |
| ·石斛亲缘关系分析 | 第45-46页 |
| ·小结 | 第46-47页 |
| 3 铁皮石斛的人工授粉与无菌播种 | 第47-56页 |
| ·材料 | 第47-48页 |
| ·植物材料 | 第47页 |
| ·主要试剂 | 第47页 |
| ·试验仪器 | 第47-48页 |
| ·常用试剂配制 | 第48页 |
| ·方法 | 第48-49页 |
| ·人工授粉的方法 | 第48页 |
| ·种子萌发 | 第48-49页 |
| ·数据整理分析 | 第49页 |
| ·结果分析 | 第49-56页 |
| ·人工授粉 | 第49-52页 |
| ·铁皮石斛种子在5种不同培养基上的萌发情况 | 第52-54页 |
| ·不同植物生长调节剂对铁皮石斛种子萌发的作用 | 第54-55页 |
| ·不同添加物对铁皮石斛种子萌发的作用 | 第55-56页 |
| ·小结 | 第56页 |
| 4 铁皮石斛ACC氧化酶基因的克隆 | 第56-78页 |
| ·材料 | 第56-58页 |
| ·植物材料 | 第56页 |
| ·主要试剂 | 第56页 |
| ·试验仪器 | 第56-57页 |
| ·常用试剂配制 | 第57-58页 |
| ·方法 | 第58-66页 |
| ·铁皮石斛ACC氧化酶基因扩增与克隆 | 第58-63页 |
| ·引物设计 | 第58页 |
| ·RNA提取 | 第58-59页 |
| ·cDNA合成 | 第59页 |
| ·PCR扩增ACC氧化酶基因 | 第59-60页 |
| ·ACC氧化酶基因的TA克隆 | 第60-61页 |
| ·连接产物的转化 | 第61页 |
| ·重组质粒的筛选和鉴定 | 第61-62页 |
| ·目的基因序列测定及生物信息学分析 | 第62-63页 |
| ·ACC氧化酶基因片段表达载体的构建 | 第63-65页 |
| ·ACC氧化酶基因的扩增和TA克隆 | 第63-64页 |
| ·ACC氧化酶基因片段和载体pET-28a(+)的制备 | 第64页 |
| ·连接及转化 | 第64-65页 |
| ·重组表达质粒的酶切鉴定 | 第65页 |
| ·重组ACC氧化酶蛋白的表达与条件优化 | 第65-66页 |
| ·ACC氧化酶基因片段的表达 | 第65页 |
| ·表达条件的筛选优化 | 第65-66页 |
| ·结果分析 | 第66-78页 |
| ·RNA提取 | 第66页 |
| ·PCR扩增 | 第66-67页 |
| ·ACC基因片段测序结果 | 第67-69页 |
| ·同源性分析 | 第67-69页 |
| ·遗传进化分析 | 第69页 |
| ·蛋白质组成结构、功能分析与三维结构模型构建 | 第69-75页 |
| ·原核表达载体的构建 | 第75-76页 |
| ·表达基因的T克隆 | 第75-76页 |
| ·原核表达载体的构建 | 第76页 |
| ·重组蛋白的表达 | 第76-78页 |
| ·重组蛋白表达产物SDS-PAGE鉴定结果 | 第77页 |
| ·表达条件的筛选结果 | 第77-78页 |
| ·小结 | 第78页 |
| 5 讨论 | 第78-87页 |
| ·影响ISSR反应的因素及26种材料聚类分析 | 第78-81页 |
| ·铁皮石斛的人工授粉与无菌播种 | 第81-83页 |
| ·关于铁皮石斛的人工授粉 | 第81-82页 |
| ·关于铁皮石斛种子的无菌萌发 | 第82-83页 |
| ·铁皮石斛ACC氧化酶基因的克隆 | 第83-87页 |
| ·铁皮石斛总RNA的提取 | 第83-84页 |
| ·ACC氧化酶基因的克隆 | 第84-85页 |
| ·ACC氧化酶基因蛋白质组成结构、功能分析与三维结构模型构建 | 第85页 |
| ·ACC氧化酶基因的原核表达 | 第85-87页 |
| 6 参考文献 | 第87-102页 |
| 附录 石斛属植物属下分类系统 | 第102-105页 |
| 致谢 | 第105-106页 |
| 攻读博士学位期间发表的论文 | 第106-107页 |
| 本论文创新点 | 第107页 |