| 摘要 | 第1-11页 |
| ABSTRACT | 第11-16页 |
| 第一章 文献综述 | 第16-48页 |
| 1 灰飞虱的发生、危害及抗药性现状 | 第16-17页 |
| ·暴发原因分析 | 第16-17页 |
| ·灰飞虱对不同药剂的抗药性现状 | 第17页 |
| 2 毒死蜱和噻嗪酮 | 第17-18页 |
| ·毒死蜱简介 | 第17-18页 |
| ·噻嗪酮简介 | 第18页 |
| 3 昆虫抗性机制研究 | 第18-38页 |
| ·表皮穿透速率降低 | 第19页 |
| ·解毒代谢抗性 | 第19-38页 |
| ·昆虫酯酶与其介导的抗药性 | 第19-27页 |
| ·昆虫细胞色素P450介导的抗药性 | 第27-36页 |
| ·昆虫谷胱甘肽S-转移酶与昆虫抗药性 | 第36-38页 |
| 4 抗性靶标机理研究 | 第38-46页 |
| ·γ-氨基丁酸受体与昆虫抗药性 | 第38-39页 |
| ·钠离子通道与昆虫抗药性 | 第39-40页 |
| ·烟碱型乙酰胆碱受体与昆虫抗药性 | 第40-41页 |
| ·昆虫乙酰胆碱酯酶与昆虫抗药性 | 第41-45页 |
| ·乙酰胆碱酯酶的高级结构 | 第41-42页 |
| ·乙酰胆碱酯酶动力学参数 | 第42-43页 |
| ·AChE突变与抗药性的关系 | 第43-45页 |
| ·AChE量变与抗药性的关系 | 第45页 |
| ·几丁质合成抑制剂靶标抗性研究 | 第45-46页 |
| 5 本研究的目的和意义 | 第46-48页 |
| 第二章 灰飞虱抗毒死蜱品系的抗性筛选及生化机理研究 | 第48-60页 |
| 摘要 | 第48-50页 |
| 1 材料与方法 | 第50-53页 |
| ·试验材料 | 第50页 |
| ·供试昆虫 | 第50页 |
| ·主要试剂 | 第50页 |
| ·主要仪器 | 第50页 |
| ·试验方法 | 第50-53页 |
| ·生物测定方法 | 第50-51页 |
| ·活体增效实验 | 第51页 |
| ·主要代谢酶活性测定 | 第51-53页 |
| ·蛋白质含量测定 | 第53页 |
| 2 结果与分析 | 第53-57页 |
| ·抗性筛选 | 第53-54页 |
| ·活体增效试验 | 第54-55页 |
| ·解毒代谢酶活力的测定 | 第55-56页 |
| ·乙酰胆碱酯酶活力和亲和力测定 | 第56-57页 |
| 3 讨论 | 第57-60页 |
| 第三章 灰飞虱抗噻嗪酮品系的抗性筛选及生化机理研究 | 第60-68页 |
| 摘要 | 第60-61页 |
| 1 材料与方法 | 第61-62页 |
| ·试验材料 | 第61页 |
| ·供试昆虫 | 第61页 |
| ·供试药剂 | 第61页 |
| ·试验方法 | 第61-62页 |
| ·杀虫剂毒力测定及增效实验 | 第61-62页 |
| ·酶液制备 | 第62页 |
| ·解毒酶及AChE的活力测定 | 第62页 |
| ·蛋白质含量测定 | 第62页 |
| 2 结果与分析 | 第62-66页 |
| ·灰飞虱抗噻嗪酮品系的室内抗性筛选 | 第62-64页 |
| ·噻嗪酮筛选对灰飞虱解毒代谢酶活力的影响 | 第64页 |
| ·活体增效实验 | 第64-65页 |
| ·AChE酶活力测定 | 第65-66页 |
| 3 讨论 | 第66-68页 |
| 第四章 灰飞虱羧酸酯酶基因及表达量分析 | 第68-90页 |
| 摘要 | 第68-69页 |
| 1 材料与方法 | 第69-82页 |
| ·试验材料 | 第69-71页 |
| ·供试昆虫及饲养 | 第69页 |
| ·主要试剂 | 第69-70页 |
| ·主要仪器设备 | 第70-71页 |
| ·试验方法 | 第71-82页 |
| ·灰飞虱总RNA提取 | 第71页 |
| ·引物设计 | 第71-72页 |
| ·cDNA第一链的合成及基因克隆 | 第72页 |
| ·PCR扩增灰飞虱体内羧酸酯酶基因片段 | 第72-73页 |
| ·PCR产物的纯化回收 | 第73页 |
| ·连接反应 | 第73-74页 |
| ·转化反应 | 第74页 |
| ·目标序列的测定 | 第74页 |
| ·实时荧光定量PCR | 第74-82页 |
| 2 结果与分析 | 第82-87页 |
| ·灰飞虱羧酸酯酶基因序列的验证 | 第82页 |
| ·灰飞虱抗、感毒死蜱品系间羧酸酯酶基因的表达量分析 | 第82-85页 |
| ·毒死蜱抗性品系中过量表达的羧酸酯酶基因抗性相关性分析 | 第85页 |
| ·灰飞虱抗、感毒死蜱品系间羧酸酯酶基因序列分析 | 第85-87页 |
| 3 讨论 | 第87-90页 |
| 第五章 灰飞虱细胞色素P450基因及表达量分析 | 第90-108页 |
| 摘要 | 第90-91页 |
| 1 材料与方法 | 第91-98页 |
| ·实验材料 | 第91-92页 |
| ·供试昆虫及饲养条件 | 第91页 |
| ·主要试剂及仪器 | 第91-92页 |
| ·试验方法 | 第92-98页 |
| ·总RNA的提取及cDNA第一链的合成 | 第92页 |
| ·基因组DNA的提取 | 第92页 |
| ·P450基因片段验证及定量引物设计 | 第92-93页 |
| ·细胞色素P450基因片段克隆 | 第93页 |
| ·实时定量PCR(qPCR) | 第93-95页 |
| ·细胞色素P450基因CYP6CW1 cDNA全长的获得 | 第95-97页 |
| ·细胞色素P450基因CYP6CW1 5'侧翼区序列克隆 | 第97-98页 |
| ·产物回收克隆测序 | 第98页 |
| 2 结果与分析 | 第98-106页 |
| ·灰飞虱细胞色素P450基因序列的验证 | 第98-99页 |
| ·细胞色素P450基因定量分析 | 第99页 |
| ·CYP6CW1 cDNA全长克隆及序列分析 | 第99页 |
| ·CYP6CW1 5'调控区序列的克隆 | 第99-106页 |
| 4 讨论 | 第106-108页 |
| 第六章 毒死蜱抗性相关的羧酸酯酶基因RNAi功能分析及原核表达 | 第108-122页 |
| 摘要 | 第108-109页 |
| 1 材料与方法 | 第109-116页 |
| ·试验材料 | 第109-110页 |
| ·供试昆虫 | 第109页 |
| ·主要仪器及试剂 | 第109-110页 |
| ·试验方法 | 第110-116页 |
| ·总RNA提取 | 第110页 |
| ·5'和3'模板的合成 | 第110页 |
| ·5'和3'RACE引物设计 | 第110页 |
| ·基因全长克隆 | 第110-111页 |
| ·PCR产物回收克隆测序 | 第111-113页 |
| ·dsRNA喂食实验 | 第113页 |
| ·RNAi后功能验证 | 第113页 |
| ·Ls.CarE1原核表达 | 第113-116页 |
| 2 结果分析 | 第116-120页 |
| ·灰飞虱LsCarE1的全长克隆 | 第116-117页 |
| ·LsCarE1的RNAi分析 | 第117-119页 |
| ·Ls.CarE1原核表达及活性测定 | 第119-120页 |
| 3 讨论 | 第120-122页 |
| 全文总结 | 第122-124页 |
| 参考文献 | 第124-148页 |
| 附录 | 第148-156页 |
| 在读期间发表论文情况 | 第156-158页 |
| 致谢 | 第158页 |
