嗜水气单胞菌J-1株ahyI基因缺失株的构建及特性分析
| 摘要 | 第1-9页 |
| ABSTRACT | 第9-11页 |
| 第一篇 文献综述 | 第11-31页 |
| 第一章 嗜水气单胞菌毒力因子的研究进展 | 第11-23页 |
| 1 外毒素 | 第11-13页 |
| ·气溶素 | 第12页 |
| ·溶血毒素 | 第12页 |
| ·细胞毒性肠毒素 | 第12-13页 |
| ·HEC毒素 | 第13页 |
| 2 胞外酶类 | 第13-15页 |
| ·胞外蛋白酶 | 第13-14页 |
| ·磷脂酶 | 第14-15页 |
| ·核糖核酸酶 | 第15页 |
| 3 黏附因子 | 第15-17页 |
| ·S层 | 第15-16页 |
| ·菌毛 | 第16页 |
| ·外膜蛋白 | 第16-17页 |
| ·脂多糖 | 第17页 |
| 4 生物被膜 | 第17-18页 |
| 5 展望 | 第18页 |
| 参考文献 | 第18-23页 |
| 第二章 群体感应系统1的研究进展 | 第23-31页 |
| 1 QS1的机制 | 第23-24页 |
| 2 QS与致病性 | 第24-27页 |
| ·QS与生物被膜 | 第25页 |
| ·QS与TTSS | 第25-26页 |
| ·QS1与其他毒力因子 | 第26-27页 |
| 参考文献 | 第27-31页 |
| 第二篇 实验研究 | 第31-81页 |
| 第三章 ahyI基因的在不同来源气单胞菌中的分布 | 第31-45页 |
| 摘要 | 第31-32页 |
| 1 材料与方法 | 第32-35页 |
| ·菌株及培养 | 第32页 |
| ·主要试剂 | 第32页 |
| ·主要仪器 | 第32页 |
| ·嗜水气单胞菌J-1株ahyI基因的检测分析 | 第32-34页 |
| ·引物设计 | 第32页 |
| ·细菌DNA的提取 | 第32-33页 |
| ·PCR扩增 | 第33页 |
| ·PCR产物的纯化 | 第33页 |
| ·PCR产物的T/A连接 | 第33页 |
| ·感受态的制备 | 第33-34页 |
| ·连接产物转化感受态细胞 | 第34页 |
| ·重组质粒的鉴定 | 第34页 |
| ·测序及序列分析 | 第34页 |
| ·PCR检测不同来源气单胞菌中ahyI基因的分布 | 第34-35页 |
| ·细菌DNA的提取 | 第34页 |
| ·PCR检测 | 第34-35页 |
| 2 结果 | 第35-40页 |
| ·嗜水气单胞菌J-1株ahyI基因的分析 | 第35页 |
| ·目的基因的扩增 | 第35页 |
| ·测序结果及分析 | 第35页 |
| ·PCR检测不同来源气单胞菌ahyI基因分布 | 第35-40页 |
| 3 讨论 | 第40-41页 |
| 参考文献 | 第41-43页 |
| ABSTRACT | 第43-45页 |
| 第四章 嗜水气单胞菌ahyI基因缺失株的构建 | 第45-59页 |
| 摘要 | 第45页 |
| 1 材料与方法 | 第45-51页 |
| ·菌株和质粒 | 第45-46页 |
| ·主要试剂与仪器 | 第46页 |
| ·ahyI基因缺失株的构建 | 第46-50页 |
| ·引物的设计 | 第46页 |
| ·J-1基因组的提取及PCR扩增 | 第46页 |
| ·PCR产物的纯化及构建T-A克隆 | 第46-47页 |
| ·载体和上游目的片段的获得及连接 | 第47-48页 |
| ·转化及PCR鉴定 | 第48页 |
| ·自杀性质粒pHM5的构建 | 第48页 |
| ·pHM5-U-Cm-D质粒构建 | 第48-49页 |
| ·滤膜接合 | 第49-50页 |
| ·互补株的构建 | 第50-51页 |
| ·互补片段引物设计 | 第50页 |
| ·PCR扩增及连接 | 第50-51页 |
| ·互补质粒的构建 | 第51页 |
| 2 结果 | 第51-55页 |
| ·缺失株的构建 | 第51-54页 |
| ·ahyI基因上下游序列扩增 | 第51-52页 |
| ·上、下游片段的连接 | 第52页 |
| ·pHM5-U-D质粒的构建 | 第52页 |
| ·氯霉素基因的酶切鉴定 | 第52-53页 |
| ·pHM5-U-Cm-D质粒的构建 | 第53页 |
| ·嗜水气单胞菌J-1株ahyI基因缺失株的鉴定 | 第53-54页 |
| ·互补株的构建 | 第54-55页 |
| ·互补片段的PCR扩增 | 第54页 |
| ·互补株的PCR鉴定 | 第54-55页 |
| 3 讨论 | 第55-56页 |
| 参考文献 | 第56-57页 |
| ABSTRACT | 第57-59页 |
| 第五章 嗜水气单胞菌ahyI基因缺失株的特性分析 | 第59-81页 |
| 摘要 | 第59页 |
| 1 材料与方法 | 第59-68页 |
| ·菌株和质粒 | 第59-60页 |
| ·主要试剂与仪器 | 第60页 |
| ·特性分析 | 第60-68页 |
| ·生长曲线的测定 | 第60页 |
| ·AI-1产生水平的比较 | 第60-61页 |
| ·信号分子AI-2的检测 | 第61-62页 |
| ·溶血价的测定 | 第62页 |
| ·胞外蛋白酶活性 | 第62-63页 |
| ·全菌蛋白SDS-PAGE | 第63-64页 |
| ·胞外蛋白SDS-PAGE | 第64页 |
| ·外膜蛋白SDS-PAGE | 第64-65页 |
| ·细胞黏附 | 第65页 |
| ·细胞侵袭 | 第65-66页 |
| ·生物被膜 | 第66页 |
| ·半数致死量 | 第66页 |
| ·荧光定量PCR进行基因表达量分析 | 第66-68页 |
| 2 结果 | 第68-76页 |
| ·生长曲线 | 第68-69页 |
| ·AI-1产生水平的比较 | 第69页 |
| ·AI-2产生水平的比较 | 第69-70页 |
| ·溶血价的测定 | 第70页 |
| ·胞外蛋白酶活性 | 第70-71页 |
| ·全菌蛋白SDS-PAGE | 第71页 |
| ·胞外产物SDS-PAGE | 第71-72页 |
| ·外膜蛋白SDS-PAGE | 第72页 |
| ·细胞黏附 | 第72-73页 |
| ·细胞侵袭 | 第73页 |
| ·生物被膜 | 第73-74页 |
| ·半数致死量 | 第74-75页 |
| ·荧光定量PCR进行基因表达量分析 | 第75-76页 |
| 3 讨论 | 第76-77页 |
| 参考文献 | 第77-80页 |
| ABSTRACT | 第80-81页 |
| 全文总结 | 第81-83页 |
| 致谢 | 第83页 |
