| 致谢 | 第1-6页 |
| 中文摘要 | 第6-13页 |
| Abstract | 第13-20页 |
| 目录 | 第20-25页 |
| 绪论 | 第25-28页 |
| 1 第一部分 RARα的sumo-1修饰对其泛素化降解的影响 | 第28-55页 |
| ·引言 | 第28-30页 |
| ·实验材料与仪器 | 第30-34页 |
| ·细胞株、细菌、质粒与siRNA | 第30页 |
| ·药物与主要试剂 | 第30-33页 |
| ·实验仪器 | 第33-34页 |
| ·实验方法 | 第34-41页 |
| ·细胞培养 | 第34页 |
| ·质粒扩增 | 第34页 |
| ·质粒转染及siRNA干扰技术 | 第34-35页 |
| ·Western blotting法检测蛋白含量变化 | 第35-36页 |
| ·免疫沉淀检测蛋白相互作用 | 第36-37页 |
| ·双荧光素酶报告基因检测系统检测蛋白转录活性 | 第37页 |
| ·Real Time RT-PCR测定相关基因转录水平变化 | 第37-39页 |
| ·慢病毒颗粒的包装、滴度测定和细胞转染 | 第39-40页 |
| ·细胞表面抗原CDllb表达的检测 | 第40-41页 |
| ·实验结果 | 第41-53页 |
| ·第399位赖氨酸的突变减弱了RARα蛋白的sumo-1修饰 | 第41-43页 |
| ·ATRA下调sumo-1及RARα-sumo-1结合蛋白 | 第43-44页 |
| ·第399位赖氨酸的突变增强了RARα蛋白的泛素化降解水平,并减弱了其蛋白稳定性 | 第44-46页 |
| ·第399位赖氨酸的突变减弱了RARα蛋白经ATRA诱导的转录激活 | 第46-48页 |
| ·sumo-1对于维持RARα蛋白的稳定性是至关重要的 | 第48-49页 |
| ·sumo-1的敲除抑制了RARα蛋白的转录活性 | 第49-50页 |
| ·第399位赖氨酸突变的RARα不能介导ATRA诱导细胞分化 | 第50-52页 |
| ·sumo-1的低表达不利于ATRA诱导细胞分化 | 第52-53页 |
| ·讨论 | 第53-55页 |
| 2 第二部分 E2F1调控RARα泛素化降解的作用研究 | 第55-85页 |
| ·引言 | 第55-57页 |
| ·实验材料与仪器 | 第57-59页 |
| ·细胞株、细菌、质粒与siRNA | 第57页 |
| ·药物与主要试剂 | 第57-58页 |
| ·实验仪器 | 第58-59页 |
| ·实验方法 | 第59-63页 |
| ·免疫组化检测组织内蛋白表达情况 | 第59页 |
| ·细胞培养 | 第59页 |
| ·质粒扩增 | 第59页 |
| ·质粒转染及siRNA干扰技术 | 第59页 |
| ·Western blotting法检测蛋白含量变化 | 第59-60页 |
| ·Real Time RT-PCR测定相关基因转录水平变化 | 第60页 |
| ·免疫沉淀检测蛋白相互作用 | 第60页 |
| ·双荧光素酶报告基因检测系统检测蛋白转录活性 | 第60页 |
| ·免疫荧光法检测蛋白定位情况 | 第60页 |
| ·GST-pull down体外检测蛋白相互作用 | 第60-62页 |
| ·细胞内ALP活性的检测 | 第62-63页 |
| ·实验结果 | 第63-83页 |
| ·RARα在骨肉瘤中呈阴性表达,而E2F1呈阳性表达 | 第63-64页 |
| ·骨肉瘤中E2F1及RARα蛋白的表达水平呈负相关 | 第64-66页 |
| ·E2F1负性调控RARα的蛋白水平 | 第66-67页 |
| ·E2F1不影响RARα mRNA水平 | 第67-68页 |
| ·E2F1促进RARα的泛素化降解 | 第68-70页 |
| ·E2F1负调控ATRA诱导的RARα转录激活 | 第70-72页 |
| ·E2F1与RARα相互结合 | 第72-75页 |
| ·E2F1与RARα蛋白中与彼此结合相关的结构域 | 第75-77页 |
| ·E2F1-N-△4不能促进RARα蛋-白下调 | 第77页 |
| ·E2F1高表达抑制ATRA诱导的U2OS细胞分化 | 第77-79页 |
| ·E2F1低表达促进ATRA诱导的U2OS细胞分化 | 第79-80页 |
| ·E2F1-N-△4并不能影响ATRA诱导的U2OS细胞分化 | 第80-81页 |
| ·原代骨肉瘤细胞中E2F1表达高低与其对ATRA敏感性的相关性 | 第81-83页 |
| ·讨论 | 第83-85页 |
| 3 第三部分MDM2介导RARα泛素化降解的机制研究 | 第85-111页 |
| ·引言 | 第85-87页 |
| ·实验材料与仪器 | 第87-89页 |
| ·细胞株、细菌与质粒 | 第87页 |
| ·药物与主要试剂 | 第87-88页 |
| ·实验仪器 | 第88-89页 |
| ·实验方法 | 第89-91页 |
| ·细胞培养 | 第89页 |
| ·Western blotting法检测蛋白含量变化 | 第89页 |
| ·免疫荧光法检测蛋白定位情况 | 第89页 |
| ·质粒转染并构建稳定转染细胞株 | 第89页 |
| ·免疫沉淀检测蛋白相互作用 | 第89页 |
| ·蛋白体外泛素化实验 | 第89-90页 |
| ·台盼蓝拒染法检测细胞增殖活性 | 第90页 |
| ·细胞内ALP活性的检测 | 第90-91页 |
| ·实验结果 | 第91-108页 |
| ·ATRA促进RARα在细胞质中发生降解 | 第91页 |
| ·ATRA促进MDM2蛋白上调并于细胞质中累积 | 第91-93页 |
| ·MDM2依赖于其泛素连接酶活性促进RARα的下调 | 第93-94页 |
| ·MDM2低表达促进RARα上调并增强其蛋白稳定性 | 第94-95页 |
| ·MDM2能够促进RARα蛋白的多聚泛素化 | 第95-97页 |
| ·MDM2能与RARα生结合 | 第97-99页 |
| ·MDM2蛋白第1-109位氨基酸所在的结构域对其与RARα的结合至关重要 | 第99-100页 |
| ·Nutlin-3抑制MDM2与RARα的结合 | 第100-101页 |
| ·MDM2与RARα的结合是MDM2促进RARα泛素化降解的前提 | 第101-102页 |
| ·MDM2高表达抑制ATRA诱导的U2OS细胞分化 | 第102-103页 |
| ·MDM2低表达促进ATRA诱导的U2OS细胞分化 | 第103-105页 |
| ·MDM2泛素连接酶活性抑制剂HLI373促进RARα蛋白的上调并抑制其多聚泛素化 | 第105-106页 |
| ·HLI373协同ATRA诱导骨肉瘤细胞分化 | 第106-108页 |
| ·讨论 | 第108-111页 |
| 总结 | 第111-112页 |
| 参考文献 | 第112-119页 |
| 综述 | 第119-131页 |
| 参考文献 | 第127-131页 |
| 作者简历及在学期间所取得的科研成果 | 第131-134页 |
