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稳定表达鸡恒定链基因的P815细胞株的建立及鉴定

摘要第1-4页
Abstract第4-5页
主要符号表第5-6页
目录第6-8页
文献综述第8-17页
 1 Ii 的分子结构第8-9页
 2 Ii 的功能第9-11页
   ·作为 MHC-II 类分子的分子伴侣第9-10页
   ·促进 B 细胞成熟第10-11页
 3 Ii 与疾病的关系第11-13页
   ·Ii 与肿瘤疾病的关系第11-12页
   ·Ii 与炎症的关系第12-13页
   ·Ii 与自身免疫病的关系第13页
   ·Ii 与其他疾病的关系第13页
 4 Ii 的应用第13-15页
   ·作为一种新型的免疫载体第14页
   ·免疫调节第14-15页
   ·作为多种疾病的药物靶分子第15页
 5 国内外研究概况第15页
 6 研究目的与意义第15-17页
引言第17-18页
1 材料与方法第18-29页
   ·质粒、工程菌和细胞株第18页
   ·主要工具酶与试剂第18页
   ·主要试剂的配制第18-20页
     ·培养细菌所用试剂第18-19页
     ·细胞培养所用试剂第19-20页
     ·制备感受态细胞所用试剂第20页
     ·琼脂糖凝胶电泳所用溶液第20页
   ·主要仪器第20页
   ·真核荧光表达载体 pEGFP-C1/Ii, pDsRed2-N1/Ii 的构建第20-25页
     ·引物设计第20-21页
     ·Ii 基因全长的 PCR 扩增第21页
     ·PCR 产物的回收和纯化第21-22页
     ·鸡 Ii 基因真核荧光表达质粒的构建第22-25页
   ·稳定表达 Ii P815 细胞株的建立第25-29页
     ·真核转染超纯质粒 DNA 的提取第25-26页
     ·P815 细胞的复苏、传代及转染准备第26页
     ·G418 工作浓度的确定第26-27页
     ·脂质体介导的转染第27页
     ·稳定表达 Ii P815 细胞株的 G418 筛选第27页
     ·稳定表达 Ii P815 细胞株的 RT-PCR 鉴定第27-29页
2 结果与分析第29-38页
   ·鸡 Ii 基因 PCR 产物检测第29页
   ·重组质粒 pEGFP-C1/Ii 的双酶切与 PCR 鉴定第29页
   ·pEGFP-C1,pEGFP-C1/Ii 真核超纯质粒的检测第29-30页
   ·不同物种 Ii 蛋白质序列同源性比较和进化树制作第30-32页
   ·折叠识别方法预测不同物种 Ii 蛋白质结构第32-33页
   ·WoLF PSORT Prediction 预测 Ii 细胞内定位特性第33-34页
   ·瞬时转染 COS7 细胞荧光观察第34-35页
   ·G418 筛选工作浓度确定第35页
   ·稳定阳性克隆株 P815-GFP-Ii RT-PCR 结果第35-36页
   ·荧光显微镜下 P815-GFP-Ii 的 Ii 表达与定位情况第36页
   ·P815-GFP-Ii 细胞株稳定性的鉴定结果第36-38页
3 讨论第38-43页
   ·重组质粒的构建与鉴定第38-39页
     ·Ii 基因片段的获取第38-39页
     ·阳性重组质粒的鉴定第39页
   ·P815 细胞的冻存与复苏第39-40页
   ·真核重组质粒稳定转染第40-41页
   ·P815-GFP-Ii 细胞株的 RT-PCR 检测第41页
   ·鸡 Ii 基因生物信息学分析第41-42页
   ·应用 P815-GFP-Ii 的展望第42-43页
4 结论第43-44页
参考文献第44-51页
致谢第51-52页
作者简介第52页

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