| 摘要 | 第1-5页 |
| Abstract | 第5-12页 |
| 文献综述 | 第12-23页 |
| 1 鸡传染性贫血病毒 | 第12-15页 |
| 2 猪圆环病毒 | 第15-17页 |
| 3 鸭圆环病毒 | 第17-23页 |
| 引言 | 第23-25页 |
| 1 材料与方法 | 第25-36页 |
| ·载体、菌种与实验动物 | 第25页 |
| ·主要试剂与器材 | 第25页 |
| ·主要试剂 | 第25页 |
| ·主要器材 | 第25页 |
| ·主要试剂配制 | 第25-28页 |
| ·核酸电泳试剂 | 第25-26页 |
| ·感受态细胞制备试剂 | 第26页 |
| ·原核表达所需试剂 | 第26页 |
| ·蛋白质电泳试剂 | 第26页 |
| ·蛋白提取、纯化溶液 | 第26-27页 |
| ·Western blotting 试剂 | 第27页 |
| ·ELISA 试剂配制 | 第27-28页 |
| ·DuCV dcap 基因的克隆 | 第28-30页 |
| ·引物设计 | 第28页 |
| ·病毒基因组 DNA 的扩增及纯化 | 第28-29页 |
| ·重组质粒的构建 | 第29-30页 |
| ·pET-28a-dcap 的诱导表达 | 第30-31页 |
| ·IPTG 诱导剂诱导表达 | 第30-31页 |
| ·SDS-PAGE 分析表达产物 | 第31页 |
| ·蛋白的纯化 | 第31-33页 |
| ·蛋白的大量制备 | 第31-32页 |
| ·包涵体的制备与表达蛋白的可溶性鉴定 | 第32页 |
| ·包涵体的洗涤 | 第32页 |
| ·包涵体的溶解 | 第32页 |
| ·包涵体的复性 | 第32页 |
| ·包涵体的的纯化 | 第32-33页 |
| ·纯化蛋白的分析 | 第33页 |
| ·Western blotting 分析 | 第33页 |
| ·蛋白浓度的测定 | 第33页 |
| ·多克隆抗血清的制备 | 第33-34页 |
| ·表达产物免疫前处理 | 第33页 |
| ·免疫动物 | 第33页 |
| ·阴阳性血清的制备 | 第33-34页 |
| ·间接 ELISA 方法的建立 | 第34-36页 |
| ·抗原包被浓度和阳性血清稀释度的最佳工作浓度的确定 | 第34页 |
| ·羊抗鸭酶标二抗稀释度最佳工作浓度的的确定 | 第34页 |
| ·抗原最佳包被时间的确定 | 第34页 |
| ·ELISA 反应时间的确定 | 第34页 |
| ·间接 ELISA 阴、阳性临界值的确定及结果判定 | 第34页 |
| ·特异性分析和重复性试验 | 第34-35页 |
| ·间接 ELISA 方法的初步应用 | 第35-36页 |
| 2 结果与分析 | 第36-45页 |
| ·DuCV dcap 基因的克隆 | 第36-37页 |
| ·DuCV dcap基因的扩增 | 第36页 |
| ·重组质粒的构建与鉴定 | 第36-37页 |
| ·目的基因的诱导表达 | 第37-39页 |
| ·IPTG 浓度优化结果分析 | 第37页 |
| ·诱导时间的优化 | 第37-38页 |
| ·表达蛋白的可溶性分析 | 第38页 |
| ·dcap 蛋白的纯化 | 第38-39页 |
| ·纯化蛋白的分析 | 第39页 |
| ·多克隆抗血清的制备 | 第39-40页 |
| ·检测DuCV抗体间接ELISA方法的建立 | 第40-45页 |
| ·抗原包被和阳性血清的最佳工作浓度的确定 | 第40页 |
| ·羊抗鸭酶标二抗最佳稀释度的的确定 | 第40页 |
| ·抗原最佳包被时间的确定 | 第40-41页 |
| ·ELISA 反应时间的确定 | 第41页 |
| ·间接 ELISA 阴、阳性临界值的确定及结果判定 | 第41页 |
| ·特异性分析和重复性试验 | 第41-43页 |
| ·间接 ELISA 方法的初步应用 | 第43-45页 |
| 3 讨论 | 第45-48页 |
| ·重组表达载体的构建 | 第45页 |
| ·包涵体的纯化 | 第45页 |
| ·DuCV 的检测方法 | 第45-46页 |
| ·临床检测结果分析 | 第46-48页 |
| 4 结论 | 第48-49页 |
| 参考文献 | 第49-54页 |
| 附表 | 第54-56页 |
| 致谢 | 第56-57页 |
| 作者简介及在读期间发表论文 | 第57页 |
