| 摘要 | 第1-6页 |
| Abstract | 第6-8页 |
| 符号说明 | 第8-9页 |
| 目录 | 第9-11页 |
| 第一部分 文献综述 | 第11-20页 |
| 1 异种移植的历史和现状 | 第11-15页 |
| ·异种移植的历史概述 | 第11-12页 |
| ·猪作为异种移植供体 | 第12-13页 |
| ·猪作为异种移植供体的优点 | 第12页 |
| ·猪作为异种移植供体存在的问题 | 第12页 |
| ·aGal与超急性排斥反应的关系 | 第12-13页 |
| ·猪到非人灵长类异种移植HAR解决方案 | 第13-15页 |
| ·HAR与补体裂解反应 | 第13页 |
| ·消除HAR的技术发展 | 第13-15页 |
| ·国内GGTA1基因敲除猪相关研究——首批GGTATZI者胎儿的制备 | 第15页 |
| 2 GGTA1基因缺失猪制备的研究进展 | 第15-20页 |
| ·世界上首例GGTA1基因缺失猪的制备 | 第16-17页 |
| ·杂合性缺失与GGTA1基因缺失猪 | 第17-18页 |
| ·杂合性缺失的原理 | 第17页 |
| ·在GGTA1基因缺失猪制备中的LOH | 第17-18页 |
| ·制备细胞的新技术 | 第18-20页 |
| 第二部分 实验 | 第20-59页 |
| 第一章基于同源重组的传统基因打鞭制备细胞 | 第20-30页 |
| 前言 | 第20-21页 |
| 1 材料 | 第21-23页 |
| ·动物性材料与质粒 | 第21页 |
| ·实验仪器 | 第21-22页 |
| ·实验试剂及配制 | 第22页 |
| ·实验耗材 | 第22-23页 |
| 2 实验方法 | 第23-27页 |
| ·成纤维细胞系的建立和成纤维细胞培养 | 第23-25页 |
| ·GG7M产五指山小型猪耳成纤维细胞系的建立 | 第23-24页 |
| ·GGTAr"五指山小型猪胎儿成纤维细胞系的建立 | 第24页 |
| ·耳成纤维细胞/胎儿传代培养的方法 | 第24-25页 |
| ·耳成纤维细胞/胎儿成纤维细胞的冻存方法 | 第25页 |
| ·耳成纤维细胞/胎儿成纤维细胞的解冻方法 | 第25页 |
| ·pBS-GCr^y-DKO转染胎儿成纤维细胞系的研究 | 第25-27页 |
| ·五指山小型猪胎儿成纤维细胞系对嘿昤霉素毒性旳敏感性检测 | 第25-26页 |
| ·成纤维细胞电转染的方法 | 第26页 |
| ·转基因细胞的PCR鉴定 | 第26-27页 |
| 3 实验结果 | 第27-28页 |
| ·广五指山小型猪成纤维细胞系的建立 | 第27页 |
| ·胎儿成纤维细胞对嘌呤霉素敏感性的检测 | 第27-28页 |
| ·五指山小型猪胎儿成纤维细胞的电转染、蹄选及细胞克隆的PCR鉴定 | 第28页 |
| 4 讨论 | 第28-29页 |
| 5 小结 | 第29-30页 |
| 第二章利用(xGal表型缺失蹄选细胞 | 第30-48页 |
| 前言 | 第30-31页 |
| 1 材料 | 第31-32页 |
| ·动物性材料和质粒 | 第31页 |
| ·实验仪器 | 第31页 |
| ·实验试剂及配制 | 第31-32页 |
| ·实验耗材 | 第32页 |
| 2 实验方法 | 第32-39页 |
| ·利用GGTA1基因打鞭载体对胎儿成纤维细胞进行电转染 | 第32-33页 |
| ·利用免疫磁珠分选和富集细胞 | 第33-35页 |
| ·细胞系选用 | 第33页 |
| ·利用免疫磁珠富集GGTAr"细胞的实验原理 | 第33-34页 |
| ·利用免疫磁珠富集GGTAr"细胞的实验步骤 | 第34页 |
| ·单细胞克隆的培养 | 第34页 |
| ·细胞克隆的混合培养 | 第34-35页 |
| ·利用TcdA富集GGTMr"细胞 | 第35页 |
| ·利用流式细胞分选术分选（76X4/".细胞 | 第35-38页 |
| ·利用PCR鉴定细胞的依据 | 第38-39页 |
| 3 实验结果 | 第39-43页 |
| ·利用免疫磁珠制备单细胞克隆 | 第39-41页 |
| ·免疫磁珠联合流式细胞分选术制备GGT」尸?细胞 | 第41-42页 |
| ·利用TcdA联合流式细胞分选术制备细胞 | 第42-43页 |
| 4 讨论 | 第43-47页 |
| ·通过表型的差异蹄选细胞 | 第43-45页 |
| ·利用流式细胞术进行细胞分选 | 第44-45页 |
| ·磁激活细胞分选（MACS)的应用 | 第45页 |
| ·GGTAl-/-细胞克隆的鉴定 | 第45-46页 |
| ·细胞的制备策略及GGTAl-/-细胞产生的原因 | 第46-47页 |
| 5 小结 | 第47-48页 |
| 第三章 用GGTMr"细胞制备GGTAl基因缺失猪的研究 | 第48-59页 |
| 前言 | 第48页 |
| 1 实验材料 | 第48-51页 |
| ·动物性材料 | 第48页 |
| ·实验仪器 | 第48-49页 |
| ·实验试剂及配制 | 第49-50页 |
| ·实验耗材 | 第50-51页 |
| 2 实验方法 | 第51-52页 |
| ·体细胞核移植的供体细胞准备 | 第51页 |
| ·体细胞核移植与重构胚体外发育能力的观察 | 第51页 |
| ·胚胎移植和妊娠诊断 | 第51页 |
| ·克隆仔猪的GGTA1基因型鉴定和aGa丨表位的检测 | 第51-52页 |
| 3 实验结果 | 第52-56页 |
| ·体细胞核移植、体外发育情况与胚胎移植 | 第52页 |
| ·受体母猪妊娠检测与克隆仔猪出生 | 第52页 |
| ·克隆仔猪的GGTA1基因型鉴定 | 第52-56页 |
| 4 讨论 | 第56-58页 |
| ·部分(7G7MrZ细胞发育潜能 | 第56-57页 |
| ·细胞筛选方法对体细胞核移植实验影响 | 第57-58页 |
| 5 小结 | 第58-59页 |
| 结论 | 第59-60页 |
| 参考文献 | 第60-66页 |
| 致谢 | 第66页 |
