| 摘要 | 第1-6页 |
| Abstract | 第6-7页 |
| 英文缩写 | 第7-10页 |
| 第1章 绪论 | 第10-15页 |
| ·基因治疗概述 | 第10页 |
| ·腺病毒载体概述 | 第10-11页 |
| ·腺病毒载体生产概述 | 第11-12页 |
| ·转录因子FoxM1简介 | 第12-13页 |
| ·本文构思 | 第13-15页 |
| ·研究目的 | 第13页 |
| ·研究思路及技术 | 第13-15页 |
| 第2章 腺病毒包装及在宿主细胞内培养工艺 | 第15-24页 |
| ·前言 | 第15-16页 |
| ·实验材料及仪器 | 第16-17页 |
| ·实验方法 | 第17-21页 |
| ·宿主细胞细胞库构建 | 第17-18页 |
| ·病毒质粒转染293A细胞 | 第18-19页 |
| ·病毒噬斑形成及低熔点琼脂糖病毒噬斑挑选实验 | 第19-20页 |
| ·病毒MOI测定 | 第20页 |
| ·病毒噬斑扩增 | 第20页 |
| ·病毒颗粒转瓶培养系统扩增 | 第20-21页 |
| ·结果 | 第21-22页 |
| ·宿主细胞库建立 | 第21页 |
| ·低熔点琼脂糖病毒噬斑挑选实验 | 第21-22页 |
| ·病毒颗粒大量扩增 | 第22页 |
| ·讨论 | 第22-24页 |
| 第3章 腺病毒的收获与纯化 | 第24-36页 |
| ·前言 | 第24-25页 |
| ·实验材料及仪器 | 第25-26页 |
| ·实验方法 | 第26-29页 |
| ·腺病毒上清超滤浓缩 | 第26页 |
| ·Benzonase核酸酶消化 | 第26页 |
| ·层析柱组装 | 第26-27页 |
| ·浓缩液的阴离子交换层析纯化 | 第27页 |
| ·离子交换产物的凝胶过滤纯化 | 第27-28页 |
| ·HPLC分析 | 第28页 |
| ·组织培养半数感染剂量(TCID_(50))法测定滴度 | 第28-29页 |
| ·实验结果 | 第29-34页 |
| ·层析柱组装 | 第29-30页 |
| ·上清超滤浓缩及层析前处理分析 | 第30-31页 |
| ·组织培养半数感染剂量(TCID_(50))法测定滴度 | 第31-32页 |
| ·浓缩液的阴离子交换层析纯化 | 第32-34页 |
| ·离子交换产物的凝胶过滤纯化 | 第34页 |
| ·讨论 | 第34-36页 |
| 第4章 腺病毒的初步质量控制 | 第36-47页 |
| ·前言 | 第36-37页 |
| ·实验材料及仪器 | 第37页 |
| ·实验方法 | 第37-42页 |
| ·腺病毒氯化铯连续密度梯度纯化 | 第37-38页 |
| ·HPLC法 | 第38页 |
| ·A260紫外吸收法测定病毒颗粒数 | 第38-39页 |
| ·组织培养半数感染剂量(TCID_(50))法测定滴度 | 第39页 |
| ·病毒比滴度 | 第39-40页 |
| ·SDS-PAGE凝胶电泳 | 第40-42页 |
| ·A549细胞RCA检测法 | 第42页 |
| ·实验结果 | 第42-46页 |
| ·腺病毒氯化铯密度梯度离心纯化结果 | 第42页 |
| ·HPLC分析结果 | 第42-44页 |
| ·病毒滴度测定 | 第44页 |
| ·SDS-PAGE凝胶电泳检测hexon实验结果 | 第44-45页 |
| ·A549细胞检测法 | 第45-46页 |
| ·讨论 | 第46-47页 |
| 总结与展望 | 第47-49页 |
| 参考文献 | 第49-55页 |
| 附录B 常用缓冲液和试剂配方 | 第55-57页 |
| 致谢 | 第57-58页 |
| 附录A 攻读硕士学位期间发表的论文目录 | 第58页 |
