| 致谢 | 第1-4页 |
| 摘要 | 第4-5页 |
| Abstract | 第5-10页 |
| 第一章 绪论 | 第10-22页 |
| ·脂肪酶的研究现状 | 第10-15页 |
| ·脂肪酶的来源 | 第10-11页 |
| ·脂肪酶的结构特征 | 第11页 |
| ·脂肪酶的理化性质 | 第11-12页 |
| ·脂肪酶的催化反应机制 | 第12-13页 |
| ·脂肪酶的活性测定 | 第13-14页 |
| ·脂肪酶基因的克隆表达 | 第14页 |
| ·脂肪酶的应用 | 第14-15页 |
| ·巴斯德毕赤酵母表达系统 | 第15-16页 |
| ·巴斯德毕赤酵母表达系统的简介 | 第15页 |
| ·巴斯德毕赤酵母表达系统的优点 | 第15-16页 |
| ·巴斯德毕赤酵母高密度培养的国内外研究进展 | 第16-19页 |
| ·高密度培养简介 | 第16页 |
| ·巴斯德毕赤酵母高密度培养过程控制 | 第16-17页 |
| ·巴斯德毕赤酵母高密度培养的补料分批培养策略 | 第17-18页 |
| ·防止蛋白降解策略 | 第18-19页 |
| ·脂肪酶高密度培养的研究现状 | 第19-20页 |
| ·本课题的研究意义及研究内容 | 第20-22页 |
| 第二章 重组脂肪酶高效表达的条件优化 | 第22-33页 |
| ·实验材料 | 第22-25页 |
| ·主要仪器 | 第22-23页 |
| ·实验菌种 | 第23页 |
| ·试验药品 | 第23页 |
| ·培养基与主要试剂的配制 | 第23-25页 |
| ·实验方法 | 第25-28页 |
| ·摇瓶试验水平上脂肪酶基因工程菌的诱导培养 | 第25-26页 |
| ·脂肪酶活性测定 | 第26页 |
| ·重组脂肪酶SDS-PAGE分析 | 第26-28页 |
| ·结果与讨论 | 第28-32页 |
| ·摇瓶培养中培养基初始pH对脂肪酶基因工程菌产酶的影响 | 第28-29页 |
| ·甲醇诱导浓度及诱导时间对脂肪酶基因工程菌产酶的影响 | 第29-30页 |
| ·诱导温度对脂肪酶基因工程菌产酶的影响 | 第30-31页 |
| ·氮源对脂肪酶基因工程菌产酶的影响 | 第31页 |
| ·重组脂肪酶SDS-PAGE分析结果 | 第31-32页 |
| ·本章小结 | 第32-33页 |
| 第三章 脂肪酶基因工程菌的高密度培养及诱导表达 | 第33-47页 |
| ·实验材料 | 第33-35页 |
| ·实验菌种 | 第33页 |
| ·试验药品 | 第33页 |
| ·培养基与主要试剂的配制 | 第33-35页 |
| ·主要仪器 | 第35页 |
| ·实验方法 | 第35-39页 |
| ·种子液制备 | 第35-36页 |
| ·上罐及高密度培养条件控制 | 第36页 |
| ·脂肪酶基因工程菌高密度培养条件探讨 | 第36-37页 |
| ·分析方法 | 第37-39页 |
| ·结果与讨论 | 第39-46页 |
| ·接种量的影响 | 第39-41页 |
| ·甘油补料方式对脂肪酶高密度培养的影响 | 第41-43页 |
| ·甲醇补料方式对脂肪酶基因工程菌高密度培养诱导产酶的影响 | 第43-45页 |
| ·重组脂肪酶SDS-PAGE分析结果 | 第45-46页 |
| ·本章小结 | 第46-47页 |
| 第四章 高密度培养时重组脂肪酶的降解及其解决策略研究 | 第47-61页 |
| ·实验材料 | 第47-48页 |
| ·菌种 | 第47页 |
| ·试验药品 | 第47页 |
| ·培养基与主要试剂的配制 | 第47-48页 |
| ·主要仪器 | 第48页 |
| ·实验方法 | 第48-49页 |
| ·不同pH条件下诱导 | 第48页 |
| ·添加玉米浆粉和酪蛋白 | 第48页 |
| ·低温诱导 | 第48页 |
| ·菌体生物量的测定 | 第48页 |
| ·脂肪酶酶活的测定 | 第48页 |
| ·总蛋白浓度分析 | 第48页 |
| ·重组脂肪酶SDS-PAGE分析 | 第48-49页 |
| ·结果与讨论 | 第49-59页 |
| ·pH对脂肪酶表达的影响 | 第49-51页 |
| ·培养基的组成对脂肪酶表达的影响 | 第51-54页 |
| ·诱导温度对脂肪酶表达的影响 | 第54-57页 |
| ·优化结果 | 第57-59页 |
| ·本章小结 | 第59-61页 |
| 第五章 脂肪酶突变体基因的构建及其在毕赤酵母中的表达 | 第61-74页 |
| ·实验材料 | 第61-63页 |
| ·菌种及质粒 | 第61页 |
| ·酶及主要药品 | 第61页 |
| ·培养基与主要试剂的配制 | 第61-63页 |
| ·主要仪器 | 第63页 |
| ·实验方法 | 第63-69页 |
| ·突变体ROL(K69R)基因的构建 | 第63-67页 |
| ·突变ROL(K69R)转化毕赤酵母 | 第67-68页 |
| ·突变重组毕赤酵母工程菌的诱导表达 | 第68-69页 |
| ·脂肪酶酶活的测定 | 第69页 |
| ·总蛋白浓度分析 | 第69页 |
| ·重组脂肪酶SDS-PAGE分析 | 第69页 |
| ·结果与讨论 | 第69-73页 |
| ·PCR扩增ROL(K69R) | 第69-70页 |
| ·突变体ROL(K69R)基因测序结果及分析 | 第70页 |
| ·突变重组菌橄榄油-MMH-RB平板活性筛选 | 第70页 |
| ·突变重组菌在摇瓶中表达的结果 | 第70-71页 |
| ·突变重组菌10L发酵罐高密度培养的结果 | 第71-72页 |
| ·重组脂肪酶SDS-PAGE分析结果 | 第72-73页 |
| ·本章小结 | 第73-74页 |
| 结论 | 第74-76页 |
| 参考文献 | 第76-83页 |
| 详细摘要 | 第83-84页 |
| Abstract | 第84页 |
