| 摘要 | 第5-6页 |
| Abstract | 第6页 |
| 缩写词列表 | 第8-9页 |
| 前言 | 第9-10页 |
| 第一章 文献综述 | 第10-19页 |
| 1.1 PVY的危害及传播途径 | 第10-11页 |
| 1.2 PVY在基因及蛋白方面的研究进展 | 第11-13页 |
| 1.3 杨梅素衍生物的药理学研究 | 第13页 |
| 1.4 药物小分子与蛋白的体外互作方法的研究 | 第13-15页 |
| 1.4.1 MST技术 | 第13-14页 |
| 1.4.2 ITC技术 | 第14页 |
| 1.4.3 分子对接技术 | 第14-15页 |
| 1.5 高活性药剂的体内活体验证 | 第15-17页 |
| 1.5.1 农杆菌介导的植物转基因技术 | 第15-16页 |
| 1.5.2 农杆菌介导的植物转基因研究现状 | 第16-17页 |
| 1.5.3 蛋白免疫印迹法 | 第17页 |
| 1.6 本章小结 | 第17-19页 |
| 第二章 设计思路与研究路线 | 第19-22页 |
| 2.1 研究的目的和意义 | 第19页 |
| 2.2 拟解决的关键问题 | 第19页 |
| 2.3 研究内容 | 第19-21页 |
| 2.3.1 PVY-CP的原核表达载体构建及蛋白纯化表达与鉴定 | 第19-20页 |
| 2.3.2 抗病毒药剂分别与野生型和突变型PVY-CP的相互作用 | 第20页 |
| 2.3.3 高活性药剂的体内活体验证 | 第20-21页 |
| 2.4 技术路线 | 第21-22页 |
| 第三章 实验材料与方法 | 第22-36页 |
| 3.1 实验材料 | 第22-25页 |
| 3.1.1 质粒与表达菌株 | 第22页 |
| 3.1.2 供试蛋白和抗植物病毒小分子 | 第22页 |
| 3.1.3 实验试剂 | 第22-23页 |
| 3.1.4 主要仪器设备 | 第23-24页 |
| 3.1.5 主要缓冲溶液的配制方法 | 第24-25页 |
| 3.2 PVY-CP的载体构建 | 第25-28页 |
| 3.2.1 烟草总RNA的提取 | 第25-26页 |
| 3.2.2 cDNA的合成 | 第26页 |
| 3.2.3 PCR扩增 | 第26-27页 |
| 3.2.4 T4 ase酶连接PVY-CP基因和pET28a质粒 | 第27页 |
| 3.2.5 双酶切PVY-CP基因和pET28a质粒 | 第27-28页 |
| 3.3 PVY-CP的表达纯化 | 第28-30页 |
| 3.3.1 感受态细胞的制备 | 第28页 |
| 3.3.2 pET28a-His-PVY-CP重组质粒的转化 | 第28-29页 |
| 3.3.3 PVY-CP的表达 | 第29页 |
| 3.3.4 PVY-CP的纯化 | 第29-30页 |
| 3.4 PVY-CP的验证 | 第30-32页 |
| 3.4.1 通过聚丙烯酰胺凝胶电泳验证PVY-CP目的蛋白 | 第30-31页 |
| 3.4.2 通过高分辨质谱仪鉴定PVY-CP目的蛋白 | 第31-32页 |
| 3.5 PVY-CP与抗病毒药剂的相互作用研究 | 第32页 |
| 3.5.1 ITC研究PVY-CP蛋白与抗病毒小分子的相互作用 | 第32页 |
| 3.5.2 MST研究PVY-CP蛋白与抗病毒小分子的相互作用 | 第32页 |
| 3.6 高活性药剂的体内活体验证 | 第32-36页 |
| 3.6.1 农杆菌感受态的制备 | 第32-33页 |
| 3.6.2 农杆菌转化 | 第33页 |
| 3.6.3 农杆菌注射接种 | 第33-34页 |
| 3.6.5 喷施药剂并进行WB分析 | 第34-36页 |
| 第四章 结果与讨论 | 第36-48页 |
| 4.1 重组质粒的构建 | 第36-37页 |
| 4.1.1 双酶切验证pET28a-PVY-CP重组载体 | 第36页 |
| 4.1.2 pET28a-PVY-CP(wt)重组载体的测序鉴定 | 第36-37页 |
| 4.2 PVY-CP蛋白的鉴定 | 第37-38页 |
| 4.2.1 通过聚丙烯酰胺凝胶电泳鉴定目标蛋白 | 第37-38页 |
| 4.2.2 通过高分辨质谱鉴定目标蛋白 | 第38页 |
| 4.3 抗病毒药剂与PVY-CP体外互作研究 | 第38-43页 |
| 4.3.1 MST研究抗病毒药剂与PVY-CP体外互作 | 第38-40页 |
| 4.3.2 ITC研究抗病毒药剂与PVY-CP体外互作 | 第40-43页 |
| 4.4 药物小分子与PVY-CP分子对接情况 | 第43-44页 |
| 4.5 突变型PVY-CP的鉴定与纯化 | 第44-46页 |
| 4.6 抗病毒药剂与突变型PVY-CP体外互作研究 | 第46-47页 |
| 4.6.1 MST研究抗病毒药剂与突变型PVY-CP体外互作 | 第46页 |
| 4.6.2 ITC研究抗病毒药剂与突变型PVY-CP体外互作 | 第46-47页 |
| 4.7 高活性药剂的体内活体验证 | 第47-48页 |
| 第五章 结论 | 第48-50页 |
| 5.1 主要结论 | 第48-49页 |
| 5.1.1 PVY-CP原核表达载体的构建及蛋白纯化鉴定 | 第48页 |
| 5.1.2 抗病毒药剂与PVY-CP体外互作研究 | 第48页 |
| 5.1.3 抗病毒药剂与突变型PVY-CP体外互作研究 | 第48-49页 |
| 5.1.4 高活性药剂的体内活性验证 | 第49页 |
| 5.2 本论文的创新之处 | 第49页 |
| 5.3 本论文的不足与展望 | 第49-50页 |
| 致谢 | 第50-51页 |
| 参考文献 | 第51-57页 |
| 附录 | 第57-66页 |
| 1.课题来源 | 第57页 |
| 2.研究生期间发表的论文 | 第57-58页 |
| 3.抗病毒药剂及杨梅素衍生物结构式 | 第58-61页 |
| 4.附图 | 第61-66页 |
