| 摘要 | 第1-7页 |
| Abstract | 第7-17页 |
| 第一篇 文献综述 | 第17-37页 |
| ·血脂代谢异常引发心血管疾病 | 第17-19页 |
| ·胆固醇的合成 | 第19页 |
| ·HMGCR 相关研究 | 第19-37页 |
| ·HMGCR 催化的甲羟戊酸通路 | 第19-20页 |
| ·HMGCR 的分类 | 第20-21页 |
| ·HMGCR 的结构与功能 | 第21-26页 |
| ·HMGCR 的降解调控 | 第26-31页 |
| ·HMGCR 通路的调控 | 第31-33页 |
| ·HMGCR 相关研究 | 第33-36页 |
| ·HMGCR 的抑制剂 | 第33-35页 |
| ·HMGCR 的研究进展 | 第35-36页 |
| ·HMGCR 研究中 NADPH 的检测方法 | 第36-37页 |
| 第二篇 HMGCR 蛋白催化结构域的克隆、表达以及纯化 | 第37-54页 |
| ·实验用品 | 第37-43页 |
| ·实验用仪器 | 第37-38页 |
| ·主要试剂、溶液 | 第38-39页 |
| ·主要溶液的配制 | 第39-43页 |
| ·实验方法 | 第43-48页 |
| ·△HMGCR 引物 | 第43页 |
| ·RNA 制备 | 第43-44页 |
| ·cDNA 的合成 | 第44页 |
| ·HMGCR 催化结构域基因片段的扩增 | 第44-45页 |
| ·重组质粒 pGEX‐HisC3‐△HMGCR 的克隆 | 第45-46页 |
| ·重组蛋白△HMGCR 的表达 | 第46-47页 |
| ·重组蛋白△HMGCR 的纯化 | 第47-48页 |
| ·实验结果 | 第48-52页 |
| ·△HMGCR 目的片段的扩增 | 第48-49页 |
| ·重组质粒 pGEX‐HisC3‐△HMGCR 的构建 | 第49-50页 |
| ·重组蛋白 GST‐△HMGCR 的表达和纯化 | 第50-52页 |
| ·本章小结 | 第52-54页 |
| 第三篇 HMGCR 酶反应体系中的 NADPH 定量测定方法研究 | 第54-72页 |
| ·实验用品 | 第55-57页 |
| ·实验用仪器与设备 | 第55-56页 |
| ·主要试剂、溶液 | 第56页 |
| ·主要溶液的配制 | 第56-57页 |
| ·实验方法 | 第57-61页 |
| ·NADPH 的离子化试剂选择 | 第58页 |
| ·NADPH 的多反应质谱方法的建立 | 第58-59页 |
| ·酶反应体系中 NADPH 的液相色谱条件 | 第59-60页 |
| ·HPLC 法检测酶反应体系中 NADPH 的液相色谱条件 | 第59页 |
| ·UPLC‐ESI‐MS/MS 法检测酶反应体系中 NADPH 的液相色谱条件 | 第59-60页 |
| ·酶反应体系中 NADPH 的检出限 | 第60页 |
| ·HPLC 法检测酶反应体系中 NADPH 的检出限 | 第60页 |
| ·UPLC‐ESI‐MS/MS 法检测酶反应体系中 NADPH 的检出限 | 第60页 |
| ·酶反应体系中 NADPH 的标准曲线的制备 | 第60页 |
| ·HPLC 法检测酶反应体系中 NADPH 的标准曲线制备 | 第60页 |
| ·UPLC‐ESI‐MS/MS 法检测酶反应体系中 NADPH 的标准曲线制备 | 第60页 |
| ·酶反应体系中 NADPH 样品制备 | 第60-61页 |
| ·酶反应体系中 NADPH 的回收率、精密度 | 第61页 |
| ·数据处理 | 第61页 |
| ·实验结果 | 第61-71页 |
| ·质谱条件的优化 | 第61-65页 |
| ·离子化试剂的选择 | 第61-63页 |
| ·多反应监测条件的优化 | 第63-65页 |
| ·液相条件的优化 | 第65-68页 |
| ·NADPH 的检出限 | 第68-69页 |
| ·NADPH 的标准曲线 | 第69-71页 |
| ·NADPH 的回收率和精密度 | 第71页 |
| ·小结 | 第71-72页 |
| 第四篇 HMGCR 抑制剂的筛选 | 第72-86页 |
| ·实验用品 | 第72-74页 |
| ·实验用仪器与设备 | 第72-73页 |
| ·主要试剂、溶液 | 第73页 |
| ·主要溶液的配制 | 第73-74页 |
| ·实验方法 | 第74-77页 |
| ·色谱和质谱条件 | 第74-75页 |
| ·HMGCR 酶反应条件的建立 | 第75页 |
| ·HMGCR 酶活测定 | 第75-76页 |
| ·HMGCR 抑制剂的筛选 | 第76-77页 |
| ·HMGCR 抑制剂反应体系 | 第76页 |
| ·HMGCR 抑制剂的选择 | 第76-77页 |
| ·数据处理 | 第77页 |
| ·实验结果 | 第77-82页 |
| ·KCl 对 NADPH 的稳定性实验 | 第77-78页 |
| ·HMGCR 酶活测定 | 第78-79页 |
| ·HMGCR 抑制剂筛选 | 第79-82页 |
| ·中药对 HMGCR 的抑制作用 | 第79-80页 |
| ·皂苷类、黄酮类化合物对 HMGCR 的抑制作用 | 第80页 |
| ·茶叶对 HMGCR 的抑制作用 | 第80-81页 |
| ·茶叶中各组分对 HMGCR 的抑制作用 | 第81页 |
| ·EGCG 对 HMGCR 的抑制作用 | 第81-82页 |
| ·小结 | 第82-86页 |
| 第五篇 EGCG 对细胞内胆固醇水平以及 HMGCR 表达水平的研究 | 第86-100页 |
| ·实验用品 | 第86-90页 |
| ·实验用仪器 | 第86-87页 |
| ·主要试剂、溶液 | 第87页 |
| ·主要溶液的配制 | 第87-90页 |
| ·实验方法 | 第90-94页 |
| ·EGCG 处理 HepG2 细胞胆固醇水平的测定 | 第90-91页 |
| ·HepG2 细胞培养 | 第90页 |
| ·细胞内胆固醇含量变化的检测 | 第90-91页 |
| ·EGCG 处理 HepG2 细胞 HMGCR 基因水平变化的测定 | 第91-92页 |
| ·EGCG 处理 HepG2 细胞 HMGCR 蛋白水平变化的测定 | 第92-94页 |
| ·实验结果 | 第94-98页 |
| ·EGCG 能够抑制 HepG2 细胞胆固醇浓度 | 第94-96页 |
| ·EGCG 不能影响 HMGCR mRNA 表达水平 | 第96-97页 |
| ·EGCG 不能影响 HMGCR 蛋白表达水平 | 第97-98页 |
| ·本章小结 | 第98-100页 |
| 参考文献 | 第100-115页 |
| 攻读博士期间发表的论文 | 第115-116页 |
| 致谢 | 第116页 |
