| 符号说明 | 第1-10页 |
| 中文摘要 | 第10-12页 |
| Abstract | 第12-14页 |
| 1 前言 | 第14-28页 |
| ·产气荚膜梭菌简介 | 第14-17页 |
| ·我国产气荚膜梭菌病的流行及危害 | 第17-19页 |
| ·产气荚膜梭菌主要致病因子α毒素的研究进展 | 第19-23页 |
| ·α毒素的结构与功能 | 第19-21页 |
| ·产气荚膜梭菌病检测方法的研究进展 | 第21-23页 |
| ·免疫胶体金技术 | 第23-25页 |
| ·胶体金技术简介 | 第23-24页 |
| ·胶体金技术的基本原理 | 第24页 |
| ·胶体金免疫层析方法 | 第24页 |
| ·胶体金免疫技术的特点 | 第24-25页 |
| ·研究的目的及意义 | 第25-28页 |
| 2 材料与方法 | 第28-40页 |
| ·试验材料 | 第28-29页 |
| ·菌株及质粒 | 第28页 |
| ·实验动物 | 第28页 |
| ·主要仪器材料来源 | 第28-29页 |
| ·主要溶液配制方法 | 第29-31页 |
| ·试验方法 | 第31-40页 |
| ·产气荚膜梭菌α毒素蛋白的表达、纯化及检测 | 第31-33页 |
| ·α毒素全基因序列的测定 | 第31页 |
| ·α毒素蛋白的诱导表达 | 第31-32页 |
| ·α毒素蛋白的纯化 | 第32页 |
| ·α毒素蛋白的 Western blot 检测 | 第32-33页 |
| ·蛋白含量的测定 | 第33页 |
| ·产气荚膜梭菌α毒素多克隆抗体的制备 | 第33-34页 |
| ·实验动物及处理 | 第33页 |
| ·免疫程序 | 第33页 |
| ·抗体收获与纯化 | 第33-34页 |
| ·抗体效价的检测 | 第34页 |
| ·产气荚膜梭菌α毒素金标抗体的制备 | 第34-36页 |
| ·胶体金制备前器皿的清洁和硅化 | 第34-35页 |
| ·胶体金标记物的制备 | 第35页 |
| ·胶体金标记最适 pH 的确定 | 第35页 |
| ·胶体金标记最低蛋白稳定量的确定 | 第35-36页 |
| ·胶体金标记抗体 | 第36页 |
| ·产气荚膜梭菌α毒素金标试纸条的制备 | 第36-38页 |
| ·金标垫处理液的选择 | 第36页 |
| ·硝酸纤维膜的选择 | 第36-37页 |
| ·检测线抗体包被浓度的确定 | 第37页 |
| ·质控线二抗包被浓度的确定 | 第37页 |
| ·封闭液的选择 | 第37页 |
| ·喷膜 | 第37页 |
| ·试纸条的组装 | 第37-38页 |
| ·展开剂的选择 | 第38页 |
| ·检测方法与结果判定 | 第38页 |
| ·试纸条各项性能测试 | 第38-39页 |
| ·特异性和敏感性 | 第38-39页 |
| ·稳定性和重复性 | 第39页 |
| ·临床样品检测 | 第39-40页 |
| ·实验动物攻毒 | 第39页 |
| ·胶体金试纸条检测样品 | 第39页 |
| ·PCR 方法检测样品 | 第39-40页 |
| 3 结果与分析 | 第40-49页 |
| ·α毒素全基因序列的测定 | 第40-41页 |
| ·α毒素蛋白的诱导表达结果 | 第41-42页 |
| ·α毒素蛋白的纯化结果 | 第42页 |
| ·α毒素蛋白的 Western blot 分析结果 | 第42-43页 |
| ·α毒素蛋白含量的测定 | 第43页 |
| ·兔抗α毒素多克隆抗体的 ELISA 结果 | 第43-44页 |
| ·玻璃器皿的清洁 | 第44页 |
| ·胶体金标记最适 pH 的确定 | 第44页 |
| ·胶体金标记最低蛋白稳定量的确定 | 第44-45页 |
| ·产气荚膜梭菌α毒素金标试纸条的制备 | 第45-46页 |
| ·金标垫处理液的选择 | 第45页 |
| ·硝酸纤维膜的选择 | 第45页 |
| ·检测线抗体包被浓度的确定 | 第45-46页 |
| ·质控线二抗包被浓度的确定 | 第46页 |
| ·封闭液的选择 | 第46页 |
| ·展开剂的选择 | 第46页 |
| ·试纸条各项性能测试 | 第46-48页 |
| ·试纸条特异性和敏感性的检测 | 第46-47页 |
| ·试纸条重复性和稳定性的检测 | 第47-48页 |
| ·临床样品检测 | 第48-49页 |
| ·试纸条检测样品结果 | 第48页 |
| ·PCR 方法检测样品结果 | 第48-49页 |
| 4 讨论 | 第49-54页 |
| ·α毒素蛋白的表达 | 第49页 |
| ·α毒素多克隆抗体的制备 | 第49页 |
| ·抗体的纯化 | 第49-50页 |
| ·金标抗体的制备 | 第50-51页 |
| ·玻璃器皿的清洁 | 第50页 |
| ·胶体金标记物的制备 | 第50页 |
| ·抗体的选择 | 第50-51页 |
| ·胶体金标记最适 pH 的确定 | 第51页 |
| ·胶体金标记最低蛋白稳定量的确定 | 第51页 |
| ·产气荚膜梭菌α毒素金标试纸条的制备 | 第51-52页 |
| ·免疫层析材料的选择 | 第51-52页 |
| ·试纸条的组装及保存 | 第52页 |
| ·试纸条各项性能测试 | 第52-54页 |
| 5 结论 | 第54-55页 |
| 参考文献 | 第55-68页 |
| 致谢 | 第68-69页 |
| 攻读学位期间发表论文及奖励 | 第69页 |