| 中文摘要 | 第1-11页 |
| 英文摘要 | 第11-13页 |
| 第一章 绪论:MAPKs激酶及PB1结构域在信号传递中的作用 | 第13-31页 |
| ·MAPK级联通路的信号传递 | 第13-14页 |
| ·嵌合(Docking)相互作用调节MAPK信号通路的特异性与效率 | 第14-17页 |
| ·PB1结构域的发现 | 第17-20页 |
| ·PB1结构域参与的信号通路 | 第20-26页 |
| ·p62/αPKC信号通路 | 第20-22页 |
| ·MEKK2和MEKK3 PB1激酶 | 第22-26页 |
| ·Par-6/αPKC信号通路 | 第26页 |
| ·总结 | 第26-28页 |
| 参考文献 | 第28-31页 |
| 第二章 人类MEKK3蛋白PB1结构域的溶液结构及其与MEK5 PB1的相互作用研究 | 第31-94页 |
| 第一部分 引言 | 第31-35页 |
| 第二部分 材料和方法 | 第35-60页 |
| ·人MEKK3-PB1、MEKK2-PB1和MEK5-PB1蛋白的克隆 | 第35-39页 |
| ·目标基因的获得 | 第35-36页 |
| ·PCR产物连入pGEM-T载体进行目的片段的扩增 | 第36-39页 |
| ·pET22b(+)与目标基因的连接 | 第39页 |
| ·人MEKK3-PB1、MEKK2-PB1和MEK5-PB1蛋白的表达与纯化 | 第39-41页 |
| ·蛋白质分子量鉴定 | 第41-44页 |
| ·聚丙烯酰胺凝胶电泳 | 第42-44页 |
| ·质谱 | 第44页 |
| ·蛋白质浓度的测定 | 第44-45页 |
| ·NMR波谱解析人MEKK3 PB1结构域的三维溶液空间结构 | 第45-57页 |
| ·N-标记和N,C双标记重组人MEKK3 PB1结构域蛋白质的表达 | 第45-46页 |
| ·NMR实验 | 第46-57页 |
| ·NMR实验与数据变换 | 第48-50页 |
| ·主链顺序认证及侧链化学位移的获得 | 第50-53页 |
| ·氢氘交换实验 | 第53页 |
| ·二级结构的确定 | 第53-54页 |
| ·结构计算 | 第54-57页 |
| ·主链弛豫实验 | 第57页 |
| ·MEKK3-PB1和MEK5-PB1蛋白相互作用的研究 | 第57-60页 |
| ·GST pull down | 第57-58页 |
| ·化学位移干扰实验 | 第58页 |
| ·MEKK3 PB1突变体蛋白的制备 | 第58-59页 |
| ·表面等离子共振(Surface Plasmon Resonance,SPR) | 第59页 |
| ·等温滴定微量热实验(ITC) | 第59-60页 |
| 第三部分 实验结果 | 第60-92页 |
| ·PB1结构域蛋白的表达和纯化 | 第60页 |
| ·MEKK3-PB1和MEK5-PB1蛋白的分子量鉴定 | 第60-61页 |
| ·NMR波谱解析MEKK3-PB1的三维溶液空间结构 | 第61-78页 |
| ·MEKK3 PB1中存在着脯氨酸顺反异构现象 | 第61-67页 |
| ·MEKK3-PB1蛋白的化学位移认证和二级结构预测 | 第67-69页 |
| ·MEKK3 PB1蛋白结构的计算 | 第69-73页 |
| ·MEKK3 PB1的结构描述 | 第73-76页 |
| ·MEKK3 PB1的主链动力学 | 第76-78页 |
| ·MEKK3 PB1与MEK5 PB1相互作用的研究 | 第78-87页 |
| ·野生型的MEKK3 PB1与MEK5 PB1之间可以形成稳定的复合物 | 第78-82页 |
| ·突变实验揭示了结合界面碱性中心不同的残基在相互作用中有不同的重要性 | 第82-87页 |
| ·MEKK3 PB1溶液结构与晶体结构的对比 | 第87-89页 |
| ·MEKK3 PB1结构的特殊之处及其意义 | 第89-92页 |
| 参考文献 | 第92-94页 |
| 第三章 人类Mog1蛋白溶液结构及其与核转运蛋白Ran的相互作用研究 | 第94-131页 |
| 第一部分 引言 | 第94-102页 |
| 第二部分 材料与方法 | 第102-111页 |
| ·人Mog1和Ran蛋白的克隆 | 第102页 |
| ·人Mog1和Ran蛋白的表达与纯化 | 第102-105页 |
| ·材料 | 第102-103页 |
| ·方法 | 第103-104页 |
| ·His-tag融合蛋白的表达和纯化 | 第104-105页 |
| ·NMR波谱解析人Mog1的三维溶液空间结构 | 第105-110页 |
| ·NMR实验 | 第105-106页 |
| ·结构计算 | 第106-107页 |
| ·使用残留的偶极耦合约束时的结构计算 | 第107-109页 |
| ·主链弛豫实验 | 第109-110页 |
| ·Mog1和Ran蛋白相互作用的研究 | 第110-111页 |
| ·凝胶过滤色谱 | 第110页 |
| ·等温滴定微量热实验(ITC) | 第110页 |
| ·化学位移干扰实验 | 第110-111页 |
| 第三部分 实验结果 | 第111-130页 |
| ·NMR波谱解析Mog1的三维溶液空间结构 | 第111-123页 |
| ·Mog1蛋白的化学位移认证和二级结构预测 | 第111-118页 |
| ·残留的偶极耦合实验 | 第118-119页 |
| ·Mog1蛋白结构的计算 | 第119-122页 |
| ·Mog1的结构描述 | 第122-123页 |
| ·hMog1蛋白与ScMog1蛋白的结构对比 | 第123-124页 |
| ·hMog1蛋白的主链动力学 | 第124-126页 |
| ·Mog1与Ran的相互作用研究 | 第126-128页 |
| ·凝胶过滤色谱实验 | 第126-127页 |
| ·NMR化学位移扰动实验 | 第127-128页 |
| ·Mog1中的脯氨酸顺反异构化不能被PPIL1催化 | 第128页 |
| ·总结与展望 | 第128-130页 |
| 参考文献 | 第130-131页 |
| 致谢 | 第131-132页 |
| 发表论文 | 第132页 |
| 学术会议 | 第132页 |
