| 摘要 | 第1-5页 |
| Abstract | 第5-9页 |
| 第一部分 绪论 | 第9-27页 |
| 一 哺乳动物性别决定研究的历史回顾 | 第9-17页 |
| 1 睾丸决定因子-TDF假说 | 第9-11页 |
| 2 SRY/Sry基因及其表达蛋白的研究概况 | 第11-14页 |
| 3 性别决定的分子机制 | 第14-17页 |
| 二 SRY/Sry基因在哺乳动物性别控制中的应用 | 第17-18页 |
| 三 核酸疫苗的发展历史 | 第18-27页 |
| 1 核酸免疫的研究历程 | 第18-19页 |
| 2 核酸免疫的免疫应答机理 | 第19-21页 |
| 3 核酸疫苗研制的技术路线 | 第21-22页 |
| 4 核酸免疫的接种途径和剂量 | 第22-24页 |
| 5 增强核酸疫苗效力的途径 | 第24-25页 |
| 6 核酸疫苗的优势 | 第25-26页 |
| 7 核酸疫苗的安全性 | 第26-27页 |
| 第二部分 本题的研究内容和意义 | 第27-29页 |
| 一 本题的立题依据 | 第27页 |
| 二 本题的实验内容 | 第27-28页 |
| 1、核酸疫苗体外表达研究 | 第27页 |
| 2、核酸疫苗的体内表达研究 | 第27页 |
| 3、核酸疫苗引起的免疫反应的研究 | 第27-28页 |
| 三 本题的研究目的及意义: | 第28-29页 |
| 第三部分 实验部分 | 第29-49页 |
| (一) 材料 | 第29-30页 |
| (二) 方法 | 第30-49页 |
| 1 鉴定pCR3.1-Sry重组质粒的活性状态 | 第30-31页 |
| 2 制备核酸疫苗 | 第31-33页 |
| 3 核酸疫苗pCR3.1-Sry的体外及体内表达 | 第33-38页 |
| 4 Sry基因的克隆与原核表达 | 第38-46页 |
| 5 抗血清制备 | 第46-47页 |
| 6 ELISA实验 | 第47-49页 |
| 第四部分 结果 | 第49-56页 |
| 1 质粒提取及酶切验证 | 第49页 |
| 2 核酸疫苗大量制备紫外分光光度测量结果 | 第49页 |
| 3 核酸疫苗体外表达结果 | 第49-50页 |
| 4 核酸疫苗在体内表达结果 | 第50-51页 |
| 5 pET21b-Sry的构建过程 | 第51-52页 |
| 6 pET21b-Sry的诱导表达结果 | 第52-53页 |
| 7 WesternBlot实验结果 | 第53页 |
| 8 低温诱导表达Sry融合蛋白 | 第53-54页 |
| 9 酶联免疫吸附实验结果 | 第54-56页 |
| 第五部分 讨论 | 第56-62页 |
| 1 核酸疫苗质量的控制 | 第56-57页 |
| 2 免疫方案的实施 | 第57页 |
| 3 Sry基因克隆碱基缺失对其抗原性的影响 | 第57-58页 |
| 4 诱导表达Sry蛋白的可溶性分析 | 第58-59页 |
| 5 以未纯化的Sry蛋白做抗原对ELISA结果影响 | 第59-60页 |
| 6 核酸疫苗免疫途径的讨论 | 第60-62页 |
| 参考文献 | 第62-68页 |
| 附录 | 第68-76页 |
| 附录一 主要溶液的配制 | 第68-71页 |
| 附录二 质粒图谱 | 第71-74页 |
| 附录三 克隆Sry基因Genebank序列比对结果 | 第74-75页 |
| 附录四 pET21b-Sry重组质粒构建流程图 | 第75-76页 |
| 致谢 | 第76页 |