| 摘要 | 第1-3页 |
| Abstract | 第3-5页 |
| 中文文摘 | 第5-8页 |
| 目录 | 第8-11页 |
| 第1章 绪论 | 第11-29页 |
| ·能源危机 | 第11-12页 |
| ·能源定义及其分类 | 第11页 |
| ·国内外能源消费状况 | 第11-12页 |
| ·能源危机迫在眉睫 | 第12页 |
| ·乙醇生物能源——缓解能源危机的新希望 | 第12-13页 |
| ·酿酒酵母是理想的乙醇研究菌株 | 第13-15页 |
| ·分子育种技术在酿酒酵母育种中起到至关重要的应用 | 第15-18页 |
| ·常规育种 | 第15-16页 |
| ·分子育种 | 第16-18页 |
| ·分子育种在酿酒酵母中具有更大的优势和潜力 | 第18页 |
| ·以PCR为基础的基因破坏技术在酿酒酵母中的应用 | 第18-24页 |
| ·基因破坏组件的构建方法 | 第19-20页 |
| ·传统基因破坏组件构建方法 | 第20-21页 |
| ·基因破坏组件构建方法优越于传统方法 | 第21-22页 |
| ·基因破坏技术的应用 | 第22页 |
| ·基因破坏技术存在的问题 | 第22-23页 |
| ·酿酒酵母体内DNA操作方法 | 第23-24页 |
| ·总结 | 第24页 |
| ·多方面改造酿酒酵母乙醇代谢机制 | 第24-25页 |
| ·乙醇耐受性改造 | 第24页 |
| ·细胞膜透性改造 | 第24页 |
| ·乙醇的合成和分解代谢流改造 | 第24页 |
| ·能量代谢流改造 | 第24-25页 |
| ·工艺优化 | 第25页 |
| ·酿酒酵母乙醇脱氢酶相关酶类的研究 | 第25-28页 |
| ·乙醇脱氢酶Ⅰ(ADH1) | 第25-26页 |
| ·乙醇脱氢酶Ⅱ(ADH2) | 第26页 |
| ·乙醇脱氢酶Ⅲ(ADH3) | 第26页 |
| ·乙醇脱氢酶Ⅳ(ADH4) | 第26-27页 |
| ·乙醇脱氢酶Ⅴ(SFA1) | 第27页 |
| ·乙醇脱氢酶Ⅵ(ADH6) | 第27-28页 |
| ·乙醇脱氢酶Ⅶ(ADHⅦ) | 第28页 |
| ·本研究目的意义 | 第28-29页 |
| 第2章 敲除SFA1基因构建酿酒酵母突变株的研究 | 第29-41页 |
| ·材料与方法 | 第29-34页 |
| ·材料 | 第29-31页 |
| ·方法 | 第31-34页 |
| ·结果 | 第34-39页 |
| ·YS_1酵母菌SFA1基因验证 | 第34页 |
| ·构建基因敲除组件 | 第34-35页 |
| ·敲除组件基因测序验证 | 第35-36页 |
| ·克隆子验证 | 第36-37页 |
| ·筛选标记的切除和pSH47质粒的丢失 | 第37页 |
| ·突变株生长试验测定 | 第37-38页 |
| ·突变株YS_1-SFA1发酵产乙醇分析 | 第38-39页 |
| ·讨论 | 第39-40页 |
| ·小结 | 第40-41页 |
| 第3章 敲除ADH3基因构建酿酒酵母突变株的研究 | 第41-55页 |
| ·材料与方法 | 第41-46页 |
| ·材料 | 第41-42页 |
| ·方法 | 第42-46页 |
| ·结果与讨论 | 第46-53页 |
| ·酿酒酵母YS_3基因组的提取 | 第46-47页 |
| ·酵母菌基因ADH3验证 | 第47页 |
| ·质粒DNA的制备 | 第47-48页 |
| ·构建基因敲除组件 | 第48页 |
| ·敲除组件基因测序验证 | 第48-49页 |
| ·克隆子验证 | 第49页 |
| ·Kan~r抗性基因的切除 | 第49-50页 |
| ·重复利用筛选标记敲除另一条等位基因 | 第50-51页 |
| ·突变株生长试验测定 | 第51页 |
| ·突变株发酵乙醇代谢测定 | 第51-52页 |
| ·结论 | 第52-53页 |
| ·小结 | 第53-55页 |
| 第4章 YS_4和YS_5工业酵母18S rRNA分子鉴定 | 第55-63页 |
| ·前言 | 第55页 |
| ·材料与方法 | 第55-57页 |
| ·材料 | 第55-56页 |
| ·方法 | 第56-57页 |
| ·结果 | 第57-61页 |
| ·基因组DNA的提取 | 第57-58页 |
| ·18S rRNA基因的获得 | 第58页 |
| ·阳性克隆子的筛选与验证 | 第58-59页 |
| ·18SrRNA基因序列及系统进化树分析 | 第59-61页 |
| ·小结 | 第61-63页 |
| 第5章 酿酒酵母YS_3和YS_4菌株上下游同源序列分析 | 第63-75页 |
| ·试验材料 | 第63页 |
| ·菌株和主要试剂 | 第63页 |
| ·培养基 | 第63页 |
| ·引物 | 第63页 |
| ·方法 | 第63-64页 |
| ·大肠杆菌DH5α感受态细胞的制备 | 第63-64页 |
| ·YS_3和YS_4基因组DNA的提取 | 第64页 |
| ·YS_3、YS_4菌株ADH3和SFA1基因上下游序列的获得 | 第64页 |
| ·目的基因得连接与转化 | 第64页 |
| ·菌落PCR筛选阳性克隆子 | 第64页 |
| ·ADH3与SFA1基因上下游序列比对 | 第64页 |
| ·结果与讨论 | 第64-73页 |
| ·YS_3和YS_4基因组DNA的提取 | 第64-65页 |
| ·ADH3和SFA1基因的获得及检测分析 | 第65-66页 |
| ·目的基因的连接与转化 | 第66页 |
| ·菌落PCR筛选阳性克隆子 | 第66页 |
| ·ADH3与SFA1基因上下游序列分析 | 第66-73页 |
| ·小结 | 第73-75页 |
| 结论 | 第75-79页 |
| 展望 | 第79-81页 |
| 附录:主要符号对照表 | 第81-83页 |
| 参考文献 | 第83-93页 |
| 攻读学位期间承担的科研任务与主要成果 | 第93-95页 |
| 致谢 | 第95-97页 |
| 个人简历 | 第97-99页 |
