| 目录 | 第1-6页 |
| 中文摘要 | 第6-7页 |
| 英文摘要 | 第7-8页 |
| 1 前言 | 第8-17页 |
| ·骨形成蛋白受体-Ⅱ基因结构和功能的简介 | 第8-13页 |
| ·BMPR-Ⅱ基因结构及其作用机制 | 第8-10页 |
| ·BMPR-Ⅱ基因与原发式肺动脉高血压(PPH)的关系 | 第10-11页 |
| ·BMPR-Ⅱ基因在肿瘤细胞中的表达 | 第11-12页 |
| ·BNPR-Ⅱ基因与骨的形成与再生 | 第12页 |
| ·BMPR-Ⅱ基因与哺乳动物早期发育 | 第12-13页 |
| ·SMART RACE技术原理 | 第13-15页 |
| ·国内外研究现状和课题意义 | 第15-17页 |
| 2 技术路线 | 第17-19页 |
| ·5′RACE定位BMPR-Ⅱ基因转录起始位点 | 第17-18页 |
| ·鉴定转录起始位点附近(-556bp～+387bp)区域内的重要调控元件 | 第18-19页 |
| 3 实验仪器与材料 | 第19-23页 |
| ·材料 | 第19-21页 |
| ·菌种、载体和细胞系 | 第19页 |
| ·主要试剂 | 第19-20页 |
| ·其它主要试剂的配方 | 第20-21页 |
| ·主要仪器 | 第21-23页 |
| 4 实验方法 | 第23-37页 |
| ·转录起始位点的确定 | 第23-26页 |
| ·A549细胞的培养 | 第23-24页 |
| ·细胞总RNA的抽提及鉴定 | 第24页 |
| ·RT-PCR对人BMPR-Ⅱ基因mRNA 5′端的步移 | 第24-25页 |
| ·5′RACE精确定位人BMPR-Ⅱ基因的转录起始位点 | 第25-26页 |
| ·RT-PCR验证RACE结果 | 第26页 |
| ·-556bp～+387bp启动子片段中调控元件的鉴定 | 第26-34页 |
| ·重叠延伸PCR突变BMPR-Ⅱ基因-556bp～+387bp启动子区中的3个寡核苷酸片段 | 第27-32页 |
| ·酶切 | 第32页 |
| ·PCR清洁(pGL3-Basic质粒双酶切清洁) | 第32-33页 |
| ·连接 | 第33页 |
| ·制备感受态细胞 | 第33页 |
| ·转化 | 第33-34页 |
| ·接种 | 第34页 |
| ·快速鉴定 | 第34页 |
| ·抽质粒 | 第34页 |
| ·重组质粒鉴定 | 第34页 |
| ·Hela细胞培养 | 第34-35页 |
| ·重组质粒转染及瞬时表达 | 第35页 |
| ·双荧光素酶试验 | 第35-37页 |
| ·HeLa细胞裂解物的制备 | 第35页 |
| ·双荧光素酶活性测定 | 第35-37页 |
| 5 实验结果 | 第37-47页 |
| ·5′RACE及其结果鉴定 | 第37-41页 |
| ·RT-PCR对人BMPR-Ⅱ基因mRNA 5′端的步移 | 第37页 |
| ·5′RACE对人BMPR-Ⅱ基因转录起始位点的精确定位 | 第37-41页 |
| ·RT-PCR验证RACE结果 | 第41页 |
| ·BMPR-Ⅱ基因-556bp～+387bp片段突变及克隆鉴定 | 第41-45页 |
| ·重叠延伸PCR对第一个SP1结合位点(960MU1)进行突变 | 第41-42页 |
| ·960MU1重组质粒测序鉴定 | 第42-43页 |
| ·重叠延伸PCR对第二个SP1结合位点(960MU2)进行突变 | 第43-44页 |
| ·960MU2重组质粒测序鉴定 | 第44页 |
| ·重叠延伸PCR对GGC三核苷酸重复序列位点(6GC12)进行突变 | 第44-45页 |
| ·GGC12突变重组质粒测序鉴定 | 第45页 |
| ·重组报告质粒转染Hela细胞及双萤光素酶活性测定 | 第45-47页 |
| 6 讨论 | 第47-51页 |
| ·关于人BMPR-Ⅱ基因转录起始位点的确定 | 第47-48页 |
| ·关于SP1对BMPR-Ⅱ基因的转录激活作用 | 第48-50页 |
| ·关于GGC三核苷酸重复的表达调控功能 | 第50-51页 |
| 7 结论 | 第51-52页 |
| 参考文献 | 第52-56页 |
| 附录 | 第56-63页 |
| 致谢 | 第63页 |
