| 摘要 | 第1-8页 |
| Abstract | 第8-14页 |
| 第一章. 文献综述 | 第14-29页 |
| 第一节. 鱼类肿大细胞虹彩病毒病研究进展 | 第14-26页 |
| 1. 感染鱼类的肿大细胞病毒属虹彩病毒及其地理分布 | 第14-17页 |
| 2. 肿大细胞虹彩病毒的生物学研究 | 第17-19页 |
| 3. 肿大细胞虹彩病毒感染引起的病鱼临床症状和组织病理变化 | 第19-20页 |
| 4. 肿大细胞虹彩病毒的检测技术和细胞培养技术 | 第20-22页 |
| 5. 肿大细胞虹彩病毒的传播途径研究 | 第22-23页 |
| 6. 肿大细胞虹彩病毒对感染细胞的损伤机制 | 第23页 |
| 7. 肿大细胞虹彩病毒的免疫防治研究 | 第23-25页 |
| 8. 问题与展望 | 第25-26页 |
| 第二节 鱼类虹彩病毒衣壳蛋白的研究现状 | 第26-29页 |
| 1. 虹彩病毒衣壳蛋白在病毒结构与功能上的研究 | 第26页 |
| 2. 虹彩病毒主要衣壳蛋白在病毒进化和分类上的研究与应用 | 第26-27页 |
| 3. 虹彩病毒主要衣壳蛋白在病毒诊断上的应用 | 第27页 |
| 4. 虹彩病毒主要衣壳蛋白在免疫防治上的研究与应用 | 第27-28页 |
| 5. 虹彩病毒衣壳蛋白在病毒致病机制上的研究 | 第28页 |
| 6. 展望 | 第28-29页 |
| 第二章. 大菱鲆病毒性红体病的流行情况调查及其诊断 | 第29-42页 |
| ·材料与方法 | 第29-32页 |
| ·材料 | 第29-30页 |
| ·方法 | 第30-32页 |
| ·结果 | 第32-38页 |
| ·患病大菱鲆的临床症状调查 | 第32-33页 |
| ·大菱鲆病毒性红体病的流行情况调查 | 第33-35页 |
| ·大菱鲆红体病虹彩病毒的PCR 检测结果 | 第35页 |
| ·大菱鲆红体病虹彩病毒感染宿主组织的调查 | 第35-36页 |
| ·TRBIV MCP 的PCR 产物测序分析鉴定 | 第36-37页 |
| ·关于TRBIV 的传播途径的初步调查 | 第37-38页 |
| ·讨论 | 第38-41页 |
| ·大菱鲆红体病虹彩病毒(TRBIV)的流行情况 | 第38-39页 |
| ·大菱鲆红体病虹彩病毒(TRBIV)的组织敏感性调查 | 第39-40页 |
| ·大菱鲆红体病虹彩病毒(TRBIV)的预防 | 第40-41页 |
| ·结语 | 第41-42页 |
| 第三章. TRBIV MCP 在毕赤酵母 X-33 中的重组表达 | 第42-85页 |
| 第一节. TRBIV MCP 结构、功能及其分子生物学的初步分析 | 第43-47页 |
| 1. 材料与方法 | 第43页 |
| 2. 结果 | 第43-45页 |
| ·TRBIV MCP 基序(模序)位点的初步分析 | 第43-44页 |
| ·TRBIV MCP 序列抗原性、亲疏水性和跨膜区的分析 | 第44-45页 |
| 3. 讨论 | 第45-47页 |
| 第二节. TRBIV MCP 基因的真核表达载体的构建 | 第47-72页 |
| 1. 实验材料 | 第47页 |
| 2. 实验方法 | 第47-59页 |
| ·目的基因片段的制备 | 第47-50页 |
| ·载体pGAPZaA 的制备 | 第50-51页 |
| ·TRBIV MCP 的PCR 产物与载体pGAPZaA 的酶切 | 第51-52页 |
| ·酶切产物的纯化与定量 | 第52页 |
| ·TRBIV MCP 与线性pGAPZaA 的连接及其连接产物的纯化 | 第52-54页 |
| ·重组质粒pGAPZaA／TRBIV MCP 的电转化及其扩增 | 第54-55页 |
| ·重组子的筛选与鉴定 | 第55页 |
| ·重组质粒pGAPZaA／TRBIV MCP 目的片段的测序 | 第55页 |
| ·重组质粒pGAPZaA／TRBIV MCP 的大量提取 | 第55-56页 |
| ·重组质粒pGAPZaA／TRBIV MCP 的线性化、纯化及电泳鉴定 | 第56-57页 |
| ·线性化重组质粒pGAPZaA／TRBIV MCP 电转导于酵母菌X-33 | 第57-58页 |
| ·阳性酵母转化子的筛选与鉴定 | 第58-59页 |
| 3. 结果 | 第59-68页 |
| ·克隆质粒pUCm-T／TRBIV MCP 的提取结果 | 第59页 |
| ·引物设计的结果及其最佳复性温度的确定 | 第59页 |
| ·TRBIV MCP 目的基因片段的大量PCR 扩增及其纯化结果 | 第59-60页 |
| ·载体pGAPZaA 的提取、酶切效果 | 第60页 |
| ·线性载体pGAPZaA 和PCR 产物定量的结果 | 第60-61页 |
| ·重组质粒的电转化、阳性克隆的筛选及其转化效率 | 第61页 |
| ·阳性重组E.coli 的菌落PCR 检测与鉴定 | 第61-62页 |
| ·重组质粒pGAPZaA／TRBIV MCP 的提取结果 | 第62-63页 |
| ·重组质粒pGAPZaA／TRBIV-MCP 的酶切鉴定 | 第63页 |
| ·重组质粒pGAPZaA／TRBIV-MCP 目的片段的测序 | 第63-65页 |
| ·重组质粒pGAPZaA／TRBIV-MCP 的大量提取及其纯化 | 第65页 |
| ·重组质粒pGAPZaA／TRBIV-MCP 的线性化 | 第65-66页 |
| ·阳性酵母转化子的初步筛选及其转化效率 | 第66页 |
| ·阳性酵母转化子的基因组的提取及其PCR 鉴定 | 第66-68页 |
| 4. 讨论 | 第68-71页 |
| ·选择分泌型真核表达载体pGAPZaA 的原因 | 第68页 |
| ·引物设计原则和目的基因序列测定 | 第68页 |
| ·重组表达载体的线性化 | 第68-69页 |
| ·选择电转化法的原因 | 第69页 |
| ·选择毕赤酵母表达系统的原因 | 第69-71页 |
| ·阳性重组毕赤酵母的检测与鉴定 | 第71页 |
| 5. 结论 | 第71-72页 |
| 第三节. TRBIV MCP 在毕赤酵母 X-33 中的表达 | 第72-85页 |
| 1. 实验材料 | 第72-73页 |
| 2. 实验方法 | 第73-76页 |
| ·含高拷贝目的基因的重组酵母的筛选 | 第73页 |
| ·高表达量重组酵母的筛选 | 第73-74页 |
| ·酵母的小量表达研究 | 第74-75页 |
| ·免疫印迹( Western-Blot )检测目的蛋白 | 第75-76页 |
| ·重组TRBIV MCP 的表达量与表达时间的研究 | 第76页 |
| 3. 结果 | 第76-82页 |
| ·含高拷贝目的基因的重组酵母的筛选 | 第76-77页 |
| ·高表达量重组酵母的筛选 | 第77-79页 |
| ·重组酵母发酵上清的SDS-PAGE 检测 | 第79-80页 |
| ·重组酵母发酵上清的免疫印迹( Western-Blot )检测 | 第80-81页 |
| ·重组TRBIV MCP 的表达量与表达时间的研究 | 第81-82页 |
| 4. 讨论 | 第82-84页 |
| ·高效表达阳性重组酵母克隆筛选技术的评价 | 第82-83页 |
| ·目的蛋白的检测及其表达量与表达时间的关系 | 第83-84页 |
| 5. 小结 | 第84-85页 |
| 参考文献 | 第85-95页 |
| 附录1. TRBIV MCP 的PCR 扩增产物测序结果 | 第95-96页 |
| 附录2. 目的基因片段TRBIV MCP 所在的开放阅读框的测序结果 | 第96-97页 |
| 附录3. 真核表达载体pGAPZaA／TRBIV MCP 的构建流程 | 第97-98页 |
| 附录4. 本论文中所用试剂配方 | 第98-102页 |
| 致谢 | 第102页 |
