| 摘要 | 第1-9页 |
| Abstract | 第9-18页 |
| 第一章 前言 | 第18-38页 |
| 1 植物抗寒基因 | 第18-28页 |
| ·已分离和鉴定的植物抗寒基因 | 第18-21页 |
| ·植物抗寒的分子机理 | 第21-23页 |
| ·植物抗寒基因表达产物的功能 | 第23-28页 |
| ·与抗"冰冻脱水"和"冰冻保护"有关 | 第23-26页 |
| ·与酶有关 | 第26页 |
| ·与膜脂相变有关 | 第26-27页 |
| ·与信号转导和基因调控有关 | 第27-28页 |
| 2 植物抗寒基因工程 | 第28-31页 |
| ·抗冻蛋白基因途径 | 第28-29页 |
| ·膜稳定相关基因途径 | 第29-30页 |
| ·渗透胁迫相关基因途径 | 第30页 |
| ·调控基因途径 | 第30-31页 |
| 3 抑制差减杂交(SSH)技术及其在植物上的应用 | 第31-37页 |
| ·SSH的基本原理 | 第31-33页 |
| ·SSH与其他基因克隆方法的比较 | 第33页 |
| ·SSH在植物上的应用 | 第33-37页 |
| 4 本研究的目的及意义 | 第37-38页 |
| 第二章 青稞离体再生体系的建立 | 第38-44页 |
| 1 材料 | 第38页 |
| 2 方法 | 第38-39页 |
| ·材料的处理 | 第38页 |
| ·愈伤组织的诱导 | 第38-39页 |
| ·植株的再生 | 第39页 |
| 3 结果与讨论 | 第39-42页 |
| ·关于愈伤组织的诱导 | 第39-40页 |
| ·关于植株的再生 | 第40-42页 |
| 4 结论 | 第42页 |
| 5 本研究的创新点 | 第42页 |
| 6 本研究有待进一步开展的工作 | 第42-44页 |
| 第三章 青稞hblt14.2基因的克隆及转基因烟草表达研究 | 第44-83页 |
| 1 材料 | 第44页 |
| 2 方法 | 第44-64页 |
| ·青稞hblt14.2基因的克隆 | 第44-50页 |
| ·种子苗的培养 | 第44-45页 |
| ·植物DNA的提取 | 第45页 |
| ·引物的设计 | 第45页 |
| ·目的基因的PCR扩增 | 第45-47页 |
| ·PCR扩增 | 第45-46页 |
| ·扩增产物的回收 | 第46-47页 |
| ·目的基因与pMD18-T载体的连接 | 第47页 |
| ·重组质粒pMD-hblt转化大肠杆菌 | 第47-48页 |
| ·大肠杆菌感受态细胞的制备 | 第47-48页 |
| ·质粒pMD-hblt转化大肠杆菌 | 第48页 |
| ·重组质粒pMD-hblt DNA的检测 | 第48-50页 |
| ·重组质粒pMD-hblt DNA的提取 | 第48-49页 |
| ·重组质粒pMD-hblt DNA的酶切检测 | 第49-50页 |
| ·重组质粒pMD-hblt DNA的PCR检测 | 第50页 |
| ·青稞hblt14.2基因序列测定及生物信息学分析 | 第50页 |
| ·青稞hblt14.2基因在抗逆境胁迫中的功能研究 | 第50-52页 |
| ·逆境胁迫下hblt14.2基因在转录水平上的变化 | 第50-52页 |
| ·hblt14.2基因组织特异性表达检测 | 第52页 |
| ·植物表达载体的构建 | 第52-56页 |
| ·重组质粒pBI-hblt的构建 | 第52-54页 |
| ·目的基因与质粒pBI121的连接 | 第52-53页 |
| ·重组质粒pBI-hblt DNA转化大肠杆菌 | 第53页 |
| ·重组质粒pBI-hblt DNA的酶切与PCR检测 | 第53-54页 |
| ·植物表达载体pCAMBIA-BI-hblt的构建 | 第54-56页 |
| ·目的基因与质粒pCAMBIA1301的连接 | 第54-55页 |
| ·重组质粒pCAMBIA-BI-hblt DNA转化大肠杆菌 | 第55页 |
| ·重组质粒pCAMBIA-BI-hblt DNA的酶切与PCR检测 | 第55-56页 |
| ·重组质粒pCAMBIA-BI-hblt导入农杆菌 | 第56-57页 |
| ·根癌农杆菌感受态细胞的制备 | 第56页 |
| ·重组质粒pCAMBIA-BI-hblt DNA转化农杆菌 | 第56-57页 |
| ·农杆菌中质粒pCAMBIA-BI-hblt DNA的酶切与PCR检测 | 第57页 |
| ·根癌农杆菌LBA4404(pCAMBIA-BI-hblt)转化烟草 | 第57-58页 |
| ·烟草无菌苗的培养 | 第57页 |
| ·受体材料的预培养 | 第57页 |
| ·根癌农杆菌的培养 | 第57页 |
| ·农杆菌侵染 | 第57-58页 |
| ·选择培养 | 第58页 |
| ·转基因烟草苗的培养 | 第58页 |
| ·转基因烟草的检测与鉴定 | 第58-64页 |
| ·转基因烟草DNA的提取 | 第58页 |
| ·PCR检测 | 第58页 |
| ·Southern杂交检测 | 第58-61页 |
| ·RT-PCR检测 | 第61页 |
| ·抗逆性检测 | 第61-64页 |
| ·转基因烟草叶肉原生质体抗低温检测 | 第61-62页 |
| ·转基因烟草脯氨酸含量的测定 | 第62-64页 |
| 3 结果与讨论 | 第64-80页 |
| ·青稞hblt14.2基因的克隆 | 第64-65页 |
| ·青稞hblt14.2基因序列测定及生物信息学分析 | 第65-69页 |
| ·hblt14.2基因的序列分析及氨基酸组成预测 | 第65-67页 |
| ·hblt14.2基因编码蛋白的分子量及等电点 | 第67-69页 |
| ·hblt14.2基因编码蛋白的二级结构预测 | 第69页 |
| ·青稞hblt14.2基因在抗逆境胁迫中的功能研究 | 第69-70页 |
| ·逆境胁迫下hblt14.2基因在转录水平上的变化 | 第69-70页 |
| ·hblt14.2基因组织特异性表达检测 | 第70页 |
| ·植物表达载体的构建 | 第70-74页 |
| ·重组质粒pBI-hblt的构建与检测 | 第70-73页 |
| ·重组质粒pCAMBIA-BI-hblt的构建与检测 | 第73-74页 |
| ·根癌农杆菌介导的烟草转化 | 第74-75页 |
| ·转基因烟草的检测与鉴定 | 第75-80页 |
| ·PCR检测 | 第75-76页 |
| ·Southern检测 | 第76-77页 |
| ·RT-PCR检测 | 第77页 |
| ·抗低温相关检测 | 第77-80页 |
| ·转基因烟草叶肉原生质体抗低温检测 | 第77-79页 |
| ·脯氨酸含量的测定 | 第79-80页 |
| 4 结论 | 第80-81页 |
| 5 本研究的创新点 | 第81-82页 |
| 6 本研究有待进一步开展的工作 | 第82-83页 |
| 第四章 基于SSH技术的青稞差减cDNA文库的构建 | 第83-100页 |
| 1 材料 | 第83页 |
| 2 方法 | 第83-92页 |
| ·青稞苗的培养及处理 | 第83页 |
| ·植物总RNA的提取 | 第83-84页 |
| ·mRNA的分离与纯化 | 第84-85页 |
| ·双链cDNA的合成 | 第85-86页 |
| ·cDNA的酶切 | 第86-87页 |
| ·Tester cDNA与接头的连接 | 第87-88页 |
| ·消减杂交 | 第88页 |
| ·抑制PCR | 第88-90页 |
| ·PCR产物与DMD18-T载体的连接 | 第90页 |
| ·重组质粒转化大肠杆菌 | 第90页 |
| ·差减cDNA文库的构建 | 第90页 |
| ·质粒DNA的酶切检测 | 第90-91页 |
| ·cDNA片段的序列测定及同源性比对 | 第91-92页 |
| 3 结果与讨论 | 第92-98页 |
| ·植物总RNA的提取及cDNA的合成 | 第92页 |
| ·差减杂交及抑制PCR | 第92-93页 |
| ·差减cDNA文库的构建 | 第93页 |
| ·重组质粒DNA的酶切鉴定 | 第93-94页 |
| ·cDNA片段的序列测定及同源性比对 | 第94-98页 |
| 4 结论 | 第98-99页 |
| 5 本研究的创新点 | 第99页 |
| 6 本研究有待进一步开展的工作 | 第99-100页 |
| 参考文献 | 第100-114页 |
| 攻读博士学位斯间发表的文章 | 第114-115页 |
| 致谢 | 第115页 |
