| 中文摘要 | 第1-6页 |
| 英文摘要 | 第6-11页 |
| 第一章 文献综述 | 第11-36页 |
| 一 基因打靶技术综述 | 第11-21页 |
| 二 ET 克隆技术研究综述 | 第21-32页 |
| 参考文献 | 第32-36页 |
| 第二章 ET 克隆技术的初步应用 | 第36-53页 |
| 前言 | 第36页 |
| 一 材料与方法 | 第36-46页 |
| (一) 材料 | 第36-38页 |
| (二) 设计与方法 | 第38-46页 |
| 1 设计 | 第38页 |
| 2 方法 | 第38-46页 |
| ·37-BAC DNA 抽提 | 第38-39页 |
| ·8.2 kb 基因组DNA 片段的扩增 | 第39页 |
| ·8.2 kb 基因组DNA 片段的回收 | 第39页 |
| ·8.2 kb 基因组DNA 片段和XxpPNT 的修饰 | 第39-41页 |
| ·37-ET-XP 载体的构建 | 第41-43页 |
| ·Mini-HL 和HR 的获得 | 第43-44页 |
| ·pL451-HLR 载体的构建 | 第44-45页 |
| ·37-ET-XP 的转化 | 第45-46页 |
| ·Neo-HLR 的打靶(ET 克隆的发生) | 第46页 |
| ·37-ET-neo 的鉴定 | 第46页 |
| 二 结果与讨论 | 第46-53页 |
| (一) 结果 | 第46-50页 |
| (二) 讨论 | 第50-53页 |
| 第三章 Resp18 基因敲除小鼠模型的建立 | 第53-89页 |
| 前言 | 第53-55页 |
| 一 材料与方法 | 第55-70页 |
| (一) 材料 | 第55-57页 |
| (二) 方法 | 第57-70页 |
| 1 技术路线 | 第57-60页 |
| 2 实验方法 | 第60-70页 |
| 二 结果与分析 | 第70-85页 |
| 1 Blast 结果 | 第70-71页 |
| 2 Resp18 基因表达图谱的建立 | 第71-72页 |
| 3 Resp18 基因打靶载体的构建 | 第72-78页 |
| ·含有Resp18 基因的BAC DNA 的抽提及鉴定 | 第73-74页 |
| ·套取质粒及neo 基因插入质粒的构建 | 第74页 |
| ·DNA 套取的结果和效率 | 第74-75页 |
| ·neo 基因靶向插入的结果 | 第75-76页 |
| ·ET 克隆的效率 | 第76-78页 |
| 4 ES 细胞的培养、打靶、药物筛选、挑克隆 | 第78页 |
| 5 阳性ES 细胞克隆的筛选鉴定 | 第78-80页 |
| ·PCR 方法筛选 | 第78-80页 |
| ·Realtime PCR 方法筛选 | 第80页 |
| 6 Resp18 基因剔除嵌合体小鼠的获得 | 第80-81页 |
| 7 Resp18 基因剔除小鼠的基因型鉴定 | 第81-83页 |
| 8 Resp18 基因剔除小鼠的胚胎检测 | 第83-84页 |
| 9 印迹基因H-19 CpG 甲基化水平的检测 | 第84-85页 |
| 三 讨论 | 第85-89页 |
| 1 ET 克隆技术 | 第85-87页 |
| 2 Resp18 基因剔除小鼠 | 第87-89页 |
| 结论与展望 | 第89-90页 |
| 附录 | 第90-101页 |
| 参考文献 | 第101-105页 |
| 研究生期间发表论文及其他工作 | 第105-106页 |
| 致谢 | 第106页 |