| 中文摘要 | 第1-12页 |
| 英文摘要 | 第12-20页 |
| 前言 | 第20-24页 |
| 第一部分 ICA诱导小鼠ES细胞分化心肌细胞的有效作用区间研究 | 第24-41页 |
| 一、仪器与试药 | 第26-27页 |
| 二、实验方法 | 第27-31页 |
| (一)ES细胞支持培养 | 第27-28页 |
| (二)ES细胞体外分化为心肌细胞培养 | 第28-29页 |
| (三)ICA诱导ES细胞体外分化为心肌细胞的培养 | 第29页 |
| (四)免疫荧光法检测表达肌小节结构蛋白表达 | 第29页 |
| (五)Westernblot法检测心肌特异性蛋白表达 | 第29-30页 |
| (六)流式细胞术检测心肌细胞数量 | 第30-31页 |
| 三、实验结果 | 第31-38页 |
| (一)ES细胞及不同分化阶段的细胞形态观察 | 第31-32页 |
| (二)肌小节结构蛋白α-Actinin和Troponin-T在分化过程中的表达情况 | 第32-34页 |
| (三)不同时段加入ICA对分化的影响及最佳作用区间评价 | 第34-37页 |
| (四)ICA增多了由ES细胞分化得到的心肌数量 | 第37-38页 |
| 四、讨论 | 第38-40页 |
| 五、小结 | 第40-41页 |
| 第二部分 活性氧及其调控的MAPK家族在ICA诱导心肌分化中的作用研究 | 第41-64页 |
| 一、仪器与试药 | 第43-44页 |
| 二、实验方法 | 第44-48页 |
| (一)流式细胞术检测ES细胞内ROS水平 | 第44页 |
| (二)荧光显微镜检测EBs内ROS水平 | 第44-45页 |
| (三)Western blot法检测ICA对NOX4蛋白表达及p38MAPK,ERK以及JNK磷酸化水平 | 第45-46页 |
| (四)利用选择性抑制评价p38MAPK、JNK或ERK通路对心肌分化作用的影响 | 第46页 |
| (五)RT-PCR方法检测心肌特异性基因表达 | 第46-47页 |
| (六)利用特异性抑制剂评价NADPH酶对心肌分化以及p38MAPK磷酸化的影响 | 第47-48页 |
| (七)免疫荧光法检测ICA孵育前后MEF2C在细胞内分布 | 第48页 |
| 三、实验结果 | 第48-60页 |
| (一)ICA对ES细胞内ROS水平的影响 | 第48-50页 |
| (二)ICA对EBs内ROS水平的影响 | 第50-51页 |
| (三)ICA对细胞内NOX4蛋白表达的影响 | 第51-52页 |
| (四)ICA对细胞内MAPK家族磷酸化水平的影响 | 第52-54页 |
| (五)选择性抑制p38MAPK、JNK或ERK对ICA诱导心肌分化作用的影响 | 第54-56页 |
| (六)NADPH酶抑制剂对ICA促分化作用及对p38MAPK磷酸化的影响 | 第56-58页 |
| (七)ICA对MEF2C在细胞核细胞质分布的调控 | 第58-60页 |
| 四.讨论 | 第60-63页 |
| 五.小结 | 第63-64页 |
| 第三部分 ICA对小鼠ES细胞分化为心肌细胞过程中线粒体形成相关蛋白PPARα及其辅激活因子PGC-1α的影响 | 第64-88页 |
| 一、仪器与试药 | 第66-67页 |
| 二、实验方法 | 第67-70页 |
| (一)RT-PCR法检测心肌发育依赖性基因及PGC-1α、PPARα mRNA表达 | 第67-69页 |
| (二)Western blot法检测分化过程中PGC-1α和PPARα蛋白表达 | 第69页 |
| (三)免疫荧光原位检测心肌特异性蛋白Troponin-T与PPARα分布 | 第69-70页 |
| 三、实验结果 | 第70-83页 |
| (一)PGC-1α、PPARα mRNA在心肌分化过程中的表达情况 | 第70-71页 |
| (二)PGC-1α及PPARα蛋白在心肌分化过程中的表达情况 | 第71-72页 |
| (三)心肌分化早期PPARα在细胞核及细胞质的分布 | 第72-74页 |
| (四)选择性抑制PPARα对ES细胞分化为心肌细胞的影响 | 第74-75页 |
| (五)PPARα激动剂对ES细胞分化为心肌细胞的影响 | 第75-77页 |
| (六)ICA促进PGC-1α及PPARα mRNA的表达 | 第77-79页 |
| (七)ICA促进PGC-1α及PPARα蛋白的表达 | 第79-81页 |
| (八)选择性抑制p38MAPK后对ICA促进PGC-1α及PPARα蛋白表达的影 | 第81-83页 |
| 四、讨论 | 第83-87页 |
| 五、小结 | 第87-88页 |
| 参考文献 | 第88-93页 |
| 综述 | 第93-111页 |
| 参考文献 | 第105-111页 |
| 发表论文 | 第111-112页 |
| 致谢 | 第112页 |
