交链孢菌cDNA文库构建及激活蛋白基因克隆与融合表达
| 第一章 文献综述 | 第1-24页 |
| ·蛋白激发子的作用特点与生物学功能 | 第12-16页 |
| ·过敏反应及过敏蛋白(Harpin) | 第12-14页 |
| ·隐地蛋白(Cryptogea) | 第14-15页 |
| ·激活蛋白(Activator) | 第15-16页 |
| ·基因克隆技术研究进展 | 第16-17页 |
| ·克隆已知多肽分子的基因 | 第16页 |
| ·克隆已知序列基因家族新成员 | 第16-17页 |
| ·克隆已知生物活性的新分子 | 第17页 |
| ·cDNA文库构建方法研究进展 | 第17-22页 |
| ·SMART方法 | 第19页 |
| ·固相cDNA文库构建 | 第19页 |
| ·Cap trapper方法 | 第19页 |
| ·逆转录病毒cDNA表达系统构建cDNA文库 | 第19-20页 |
| ·利用体外特异位点重组反应构建cDNA文库 | 第20-22页 |
| ·文库筛选的方法 | 第22页 |
| ·研究目的与意义 | 第22-23页 |
| ·研究内容、方法和技术路线 | 第23-24页 |
| ·研究内容 | 第23页 |
| ·研究方法和技术路线 | 第23-24页 |
| 第二章 交链孢菌株cDNA入门文库的构建 | 第24-37页 |
| ·实验材料 | 第24页 |
| ·菌株 | 第24页 |
| ·试剂、酶及载体 | 第24页 |
| ·仪器 | 第24页 |
| ·实验方法 | 第24-33页 |
| ·实验菌株的培养 | 第24-25页 |
| ·器皿的处理 | 第25页 |
| ·cDNA入门文库的构建 | 第25-33页 |
| ·结果与讨论 | 第33-37页 |
| ·总RNA提取和RNA纯化 | 第33页 |
| ·cDNA一链合成、二链合成及片段分级 | 第33-35页 |
| ·入门文库质量检测 | 第35-37页 |
| 第三章 交链孢菌cDNA表达文库的构建与免疫筛选 | 第37-42页 |
| ·实验材料 | 第37页 |
| ·主要试剂、酶及载体 | 第37页 |
| ·主要实验仪器及耗材 | 第37页 |
| ·实验中主要溶液的配制 | 第37页 |
| ·实验方法 | 第37-39页 |
| ·cDNA入门文库转变为cDNA表达文库 | 第37-38页 |
| ·cDNA表达文库的免疫筛选 | 第38-39页 |
| ·结果与讨论 | 第39-42页 |
| ·构建表达文库及文库质量的评价 | 第39-40页 |
| ·免疫筛选cDNA表达文库 | 第40-42页 |
| 第四章 阳性克隆的鉴定与重组表达载体的构建 | 第42-49页 |
| ·实验材料 | 第42页 |
| ·主要试剂、酶及载体 | 第42页 |
| ·主要实验仪器及耗材 | 第42页 |
| ·实验方法 | 第42-45页 |
| ·阳性克隆的鉴定 | 第42-43页 |
| ·重组表达载体的构建 | 第43-45页 |
| ·结果与讨论 | 第45-49页 |
| ·阳性克隆的质粒鉴定 | 第45页 |
| ·阳性克隆的DNA测序及序列分析 | 第45-47页 |
| ·pMDD2重组质粒的质粒鉴定 | 第47页 |
| ·表达体系的选择 | 第47-48页 |
| ·重组表达载体的质粒鉴定 | 第48-49页 |
| 第五章 目的基因的表达与纯化 | 第49-55页 |
| ·实验材料 | 第49-50页 |
| ·主要试剂、酶及载体 | 第49页 |
| ·主要实验仪器及耗材 | 第49页 |
| ·实验中主要溶液的配制 | 第49-50页 |
| ·实验方法 | 第50-52页 |
| ·目的基因的诱导表达 | 第50-51页 |
| ·表达蛋白的纯化 | 第51-52页 |
| ·结果与讨论 | 第52-55页 |
| ·目的基因的诱导表达 | 第52-53页 |
| ·表达蛋白的亲和层析纯化 | 第53-55页 |
| 第六章 结论 | 第55-56页 |
| 参考文献 | 第56-61页 |
| 致谢 | 第61-62页 |
| 作者简历 | 第62页 |
