| 摘要 | 第1-12页 |
| ABSTRACT | 第12-15页 |
| 缩略语表 | 第15-16页 |
| 第一章 文献综述及前言 | 第16-42页 |
| 1 前言 | 第16-19页 |
| 2 辣椒素及其应用 | 第19页 |
| 3 辣椒素合成途径的研究及辣椒素合成酶的重要性 | 第19-22页 |
| 4 辣椒素合成酶基因的研究进展及提高辣椒素含量的方法 | 第22-23页 |
| ·辣椒素合成酶基因的研究进展 | 第22-23页 |
| ·提高辣椒素含量的方法 | 第23页 |
| 5 辣椒离体再生与遗传转化的研究现状 | 第23-29页 |
| ·辣椒的离体再生的研究概况 | 第23-26页 |
| ·辣椒离体培养途径 | 第23-24页 |
| ·影响辣椒离体再生培养的因素 | 第24-25页 |
| ·对策与今后的研究重点 | 第25-26页 |
| ·辣椒的遗传转化的研究 | 第26-29页 |
| ·辣椒遗传转化研究的发展及存在的问题 | 第26-28页 |
| ·对策与今后研究重点 | 第28-29页 |
| 6 转基因技术的发展及其安全性的讨论与评价 | 第29-32页 |
| ·转基因技术的发展及其重要性 | 第29-30页 |
| ·转基因产品的安全性的讨论及评价 | 第30-32页 |
| ·转基因产品的安全性的讨论 | 第30-31页 |
| ·转基因产品的安全性的评价 | 第31-32页 |
| 7 外源基因在转基因植物中的表达和遗传稳定性 | 第32-35页 |
| ·外源基因在转基因植物中的表达 | 第32-34页 |
| ·转基因沉默的种类 | 第32-33页 |
| ·转基因沉默的原因 | 第33-34页 |
| ·转化植株中外源基因的遗传稳定性及遗传规律 | 第34-35页 |
| ·外源基因在转基因植株的遗传传递中的稳定性 | 第34-35页 |
| ·外源基因的遗传规律 | 第35页 |
| 8 遗传图谱与基因定位 | 第35-37页 |
| ·遗传图谱的研究历史及现状 | 第35-36页 |
| ·基因定位 | 第36-37页 |
| ·DNA分子标记定位 | 第36页 |
| ·电子定位基因的方法 | 第36-37页 |
| 9 辣椒遗传图谱的研究 | 第37-40页 |
| ·辣椒遗传图谱的研究进展 | 第37页 |
| ·辣椒重要农艺性状的分子遗传定位 | 第37-38页 |
| ·辣椒分子遗传图谱的构建 | 第38-40页 |
| ·种内图谱 | 第38页 |
| ·种间图谱 | 第38-39页 |
| ·图谱的整合 | 第39-40页 |
| 10 辣椒C基因遗传图谱的构建 | 第40-42页 |
| 第二章 辣椒高效离体再生体系的筛选 | 第42-56页 |
| 1 材料与方法 | 第42-44页 |
| ·材料 | 第42-43页 |
| ·辣椒材料 | 第42页 |
| ·组培试剂 | 第42-43页 |
| ·MS基本培养基的配制： | 第42-43页 |
| ·激素和AgNO_3的配制 | 第43页 |
| ·方法 | 第43-44页 |
| ·基本培养条件 | 第43页 |
| ·无菌苗的培育 | 第43页 |
| ·不定芽的诱导和分化 | 第43-44页 |
| ·不定芽的伸长 | 第44页 |
| ·生根与移栽 | 第44页 |
| 2 结果与分析 | 第44-52页 |
| ·无菌苗生长时间对芽分化的影响 | 第44-45页 |
| ·辣椒基因型和外植体种类对外植体不定芽分化的影响 | 第45-46页 |
| ·不定芽的分化条件的选择 | 第46-49页 |
| ·AgNO_3对子叶不定芽分化的影响 | 第46-47页 |
| ·NAA与IAA对促进外植体出芽效果的比较 | 第47页 |
| ·6-BA与IAA的配比对不定芽分化的影响 | 第47-49页 |
| ·不定芽的伸长 | 第49-51页 |
| ·最适激素配比的确定 | 第49-50页 |
| ·最适宜GA_3浓度的选择 | 第50-51页 |
| ·环境条件的影响 | 第51页 |
| ·生根培养基的筛选 | 第51-52页 |
| 3 讨论 | 第52-54页 |
| ·关于材料基因型对植株再生的影响 | 第52-53页 |
| ·关于激素的使用 | 第53页 |
| ·关于环境条件对外植体再生的影响 | 第53页 |
| ·关于辣椒再生中的褐化问题 | 第53-54页 |
| ·关于辣椒再生中芽伸长困难 | 第54页 |
| 4 小结 | 第54-55页 |
| 5 附图 | 第55-56页 |
| 第三章 C基因对辣／甜椒的遗传转化与检测 | 第56-80页 |
| 1 材料与方法 | 第56-65页 |
| ·材料 | 第56-59页 |
| ·辣(甜)椒品种 | 第56页 |
| ·基本培养基 | 第56-57页 |
| ·大肠杆菌和农杆菌培养基 | 第56-57页 |
| ·辣椒遗传转化基本培养基 | 第57页 |
| ·目的基因、表达载体及克隆菌株 | 第57页 |
| ·主要仪器及试剂 | 第57-58页 |
| ·抗生素、植物激素及培养基中其它添加成份的配制 | 第58页 |
| ·溶液配制 | 第58-59页 |
| ·缓冲液的配制 | 第58页 |
| ·碱法提取质粒溶液的配制 | 第58页 |
| ·植物DNA提取液的配制 | 第58页 |
| ·植物RNA提取液的配制 | 第58页 |
| ·其它溶液的配制 | 第58-59页 |
| ·方法 | 第59-65页 |
| ·辣椒遗传转化体系的筛选 | 第59-60页 |
| ·预培养时间对转化的影响 | 第59页 |
| ·工程菌液浓度对转化的影响 | 第59页 |
| ·工程菌液浸染时间对转化的影响 | 第59页 |
| ·共培时间对转化的影响 | 第59页 |
| ·共培养中AS浓度对转化的影响 | 第59页 |
| ·抑菌素浓度的筛选及对转化频率的影响 | 第59-60页 |
| ·选择培养基中外植体Kan抗性水平的确定 | 第60页 |
| ·农杆菌工程菌的制备 | 第60-61页 |
| ·中间克隆载体的制备 | 第60-61页 |
| ·三亲融合法转入农杆菌 | 第61页 |
| ·C基因对辣椒和甜椒的浸染转化 | 第61-62页 |
| ·根癌农杆菌的培养 | 第61页 |
| ·外植体的准备,浸染与共培养 | 第61-62页 |
| ·转化子的筛选与再生培养 | 第62页 |
| ·阳性试管苗的快速繁殖 | 第62页 |
| ·小苗的移栽 | 第62页 |
| ·转基因植株的分子检测 | 第62-65页 |
| ·辣椒总DNA的小量提取 | 第62-63页 |
| ·PCR检测 | 第63页 |
| ·Southern杂交 | 第63-64页 |
| ·总RNA的提取 | 第64页 |
| ·一步RT-PCR | 第64页 |
| ·两步RT-PCR | 第64-65页 |
| 2 结果与分析 | 第65-75页 |
| ·辣椒遗传转化体系的筛选 | 第65-69页 |
| ·外植体预培养时间对转化的影响 | 第65页 |
| ·工程菌液的浓度对转化的影响 | 第65-66页 |
| ·菌液浸染时间对转化的影响 | 第66页 |
| ·共培养时间对转化的影响 | 第66-67页 |
| ·共培养基中AS的浓度对转化的影响 | 第67页 |
| ·抑菌素浓度的筛选及对转化频率的影响 | 第67-69页 |
| ·Amp,Cb和Ticarcillin对不定芽分化的影响 | 第68页 |
| ·Ticarcillin对农杆菌菌株LBA4404和GV3101的抑菌效果 | 第68-69页 |
| ·外植体Kan抗性水平测定 | 第69页 |
| ·转化植株分子水平的检测 | 第69-75页 |
| ·辣椒叶片基因组DNA提取液的选择 | 第69-72页 |
| ·辣椒叶片匀浆比较 | 第69-70页 |
| ·DNA电泳检测结果比较 | 第70-71页 |
| ·紫外吸收检测的比较 | 第71页 |
| ·酶切反应效果比较 | 第71-72页 |
| ·PCR扩增效果比较 | 第72页 |
| ·DNA提取效果 | 第72页 |
| ·再生植株的PCR检测 | 第72-73页 |
| ·PCR检测阳性植株排除农杆菌扩增的污染 | 第73页 |
| ·转基因辣椒基因组DNA Southern杂交检测 | 第73-74页 |
| ·外源基因的转化频率 | 第74页 |
| ·RNA的提取 | 第74页 |
| ·转化植株的一步RT-PCR分析 | 第74-75页 |
| 3 讨论 | 第75-78页 |
| ·影响辣椒遗传转化的因素 | 第75-76页 |
| ·农杆菌菌株浸染能力对转化的影响 | 第75页 |
| ·植物基因型对转化的影响 | 第75-76页 |
| ·基本遗传转化条件对转化的影响 | 第76页 |
| ·关于转基因植株筛选和分子水平的检测方法 | 第76-78页 |
| ·关于抗生素Kan的使用浓度和方法 | 第76-77页 |
| ·关于辣椒叶片基因组DNA的提取 | 第77页 |
| ·关于转基因植株分子水平检测方法的评价 | 第77-78页 |
| ·关于转基因沉默 | 第78页 |
| 4 小结 | 第78-79页 |
| 5 附图 | 第79-80页 |
| 第四章 C基因及同源Catf2基因的克隆,序列比对及表达分析 | 第80-98页 |
| 1 材料 | 第80-82页 |
| ·植物材料 | 第80页 |
| ·菌株和载体 | 第80-81页 |
| ·目的基因 | 第80-81页 |
| ·克隆菌株 | 第81页 |
| ·引物 | 第81-82页 |
| ·C基因和Catf2基因克隆和测序引物 | 第81页 |
| ·RT-PCR分析C基因和Catf2基因表达的引物 | 第81-82页 |
| ·主要试剂 | 第82页 |
| 2 方法 | 第82-84页 |
| ·DNA提取与PCR扩增 | 第82页 |
| ·电泳检测与片段回收 | 第82页 |
| ·PCR产物的T-克隆 | 第82-84页 |
| ·连接反应 | 第82-83页 |
| ·连接产物的转化涂板 | 第83页 |
| ·阳性重组子的筛选及鉴定 | 第83-84页 |
| ·筛选原理(蓝白斑法) | 第83页 |
| ·重组子的鉴定 | 第83-84页 |
| ·阳性克隆重组子的序列测定 | 第84页 |
| ·测序结果检索及系统进化分析 | 第84页 |
| ·总RNA的提取 | 第84页 |
| ·一步RT-PCR及内参转录伸长因子的扩增 | 第84页 |
| 3 结果与分析 | 第84-94页 |
| ·C基因全长序列的获得及特异引物的合成 | 第84-87页 |
| ·载体pBIAT_3测序结果在网上同源序列的比对 | 第84-85页 |
| ·据序列分析和比对结果确定C基因的完整开放阅读框 | 第85-86页 |
| ·载体pBIAT_3上C基因编码序列的确定 | 第86-87页 |
| ·C基因特异引物CS-F／CS-R对不同基因型辣椒DNA的扩增 | 第87-88页 |
| ·测序结果序列比对、编码氨基酸功能分析及同源性比较 | 第88-94页 |
| ·序列比对分析 | 第88-89页 |
| ·C基因编码氨基酸的结构与特性分析 | 第89页 |
| ·牛角形甜椒0538与辣椒0525及载体C基因的核苷酸与氨基酸序列同源性比较及功能分析 | 第89-91页 |
| ·用于RT-PCR的C基因及Catf2基因的差异引物的设计、合成与分析验证 | 第91-92页 |
| ·引物的设计与合成 | 第91-92页 |
| ·引物的PCR扩增验证 | 第92页 |
| ·总RNA的提取 | 第92页 |
| ·内参转录延长因子对RNA浓度一致性的分析 | 第92页 |
| ·半定量RT-PCR对甜椒、辣椒及牛角形甜椒果实及叶片C基因和Catf2基因表达的分析 | 第92-93页 |
| ·辣椒不同器官Catf2基因的表达分析 | 第93-94页 |
| ·甜椒052、辣椒0525和牛角形甜椒0538不同器官和果实不同部分C基因的表达 | 第94页 |
| 4 讨论 | 第94-96页 |
| 5 小结 | 第96-98页 |
| 第五章 辣椒短片段在辣椒DH群体遗传图谱中的定位 | 第98-103页 |
| 1 材料与方法 | 第98-99页 |
| ·材料 | 第98页 |
| ·遗传作图群体 | 第98页 |
| ·引物 | 第98页 |
| ·方法 | 第98-99页 |
| ·辣椒DH群体基因组DNA的PCR扩增 | 第98-99页 |
| ·辣椒DH群体PCR扩增条带的统计 | 第99页 |
| ·Join map 3.0作图 | 第99页 |
| 2 结果与分析 | 第99-100页 |
| ·标记Capsaicin对辣椒DH群体(PY)基因组DNA的扩增 | 第99页 |
| ·标记SP-L的引物SP-L／CS-R6的合成 | 第99-100页 |
| ·标记SP-L对辣椒DH群体(PY)基因组DNA的扩增结果 | 第100页 |
| ·分子连锁图谱的构建 | 第100页 |
| 3 讨论 | 第100-102页 |
| 4 小结 | 第102-103页 |
| 参考文献 | 第103-109页 |
| 致谢 | 第109-110页 |
| 下一步工作设想 | 第110-111页 |
| 作者简历 | 第111页 |
| 研究生在读期间发表文章 | 第111页 |
