| 中文摘要 | 第1-8页 |
| 英文摘要 | 第8-10页 |
| 第一部分 文献综述 | 第10-30页 |
| 1 全球关注禽流感 | 第10-15页 |
| ·历史 | 第10-11页 |
| ·发生和分布 | 第11页 |
| ·禽流感对养禽业的危害 | 第11-12页 |
| ·禽流感与人类健康 | 第12-15页 |
| ·治疗 | 第15页 |
| 2 流感病毒血凝素的分子生物学研究进展 | 第15-20页 |
| ·血凝素的结构特点 | 第16-17页 |
| ·HA的转录、翻译及后加工过程 | 第17页 |
| ·HA与病毒感染 | 第17-18页 |
| ·HA基因的裂解活性 | 第18-19页 |
| ·HA氨基酸序列与病毒毒力 | 第19-20页 |
| ·其他因素与病毒毒力 | 第20页 |
| 3 流感疫苗研究进展 | 第20-30页 |
| ·灭活疫苗 | 第20-22页 |
| ·流感病毒减毒活疫苗 | 第22-24页 |
| ·基因工程疫苗 | 第24-26页 |
| ·核酸疫苗 | 第26-28页 |
| ·利用反向遗传学操作技术制备流感疫苗 | 第28-30页 |
| 第二部分 研究内容 | 第30-62页 |
| 实验一 禽流感病毒分离株Isolate Ⅰ血凝素(HA)基因的克隆与测序分析 | 第30-45页 |
| 1 材料与方法 | 第30-37页 |
| ·材料 | 第30-31页 |
| ·方法 | 第31-37页 |
| ·病毒鉴定 | 第31-32页 |
| ·病毒RNA的提取 | 第32页 |
| ·RT-PCR扩增HA基因 | 第32-33页 |
| ·HA基因的克隆 | 第33-35页 |
| ·重组质粒的快速鉴定 | 第35-36页 |
| ·HA基因序列分析 | 第36-37页 |
| 3 结果 | 第37-42页 |
| ·HA和HI结果 | 第37页 |
| ·RT-PCR结果 | 第37页 |
| ·PCR产物的克隆与重组质粒鉴定结果 | 第37-38页 |
| ·序列测定结果 | 第38-39页 |
| ·序列比较 | 第39-41页 |
| ·HA基因序列进化关系 | 第41-42页 |
| 4 讨论 | 第42-44页 |
| ·关于病毒RNA的提取和HA的扩增 | 第42-43页 |
| ·毒株特性 | 第43页 |
| ·目的基因的选择 | 第43-44页 |
| 5 小结 | 第44-45页 |
| 实验二 真核重组表达质粒(pVAX1-HA)的构建、表达及免疫试验 | 第45-62页 |
| 1 材料与方法 | 第45-53页 |
| ·材料 | 第45-46页 |
| ·方法 | 第46-53页 |
| ·重组质粒pVAX1-HA的构建 | 第46-48页 |
| ·重组质粒pVAX1-HA鉴定 | 第48-49页 |
| ·高纯度重组表达质粒的大量提取 | 第49页 |
| ·质粒的定量与纯度鉴定 | 第49-50页 |
| ·Chicken embryo fibroblast(CEF)细胞的制备 | 第50-51页 |
| ·目的基因在CEF中的表达及鉴定 | 第51-52页 |
| ·鸡群免疫试验 | 第52-53页 |
| 2 结果 | 第53-57页 |
| ·真核表达质粒pVAX1-HA的构建 | 第53-54页 |
| ·大提质粒DNA的纯度 | 第54页 |
| ·转染结果 | 第54-55页 |
| ·大提质粒DNA的纯度 | 第55页 |
| ·EID50的测定 | 第55-56页 |
| ·免疫鸡H5N1亚型AIV抗体水平的检测结果 | 第56-57页 |
| ·攻毒后鸡群排毒情况及免疫效果 | 第57页 |
| 3 讨论 | 第57-61页 |
| ·核酸疫苗表达载体的选择 | 第57-58页 |
| ·脂质体介导法转染 | 第58-59页 |
| ·重组表达质粒的纯度 | 第59页 |
| ·免疫接种途径的选择 | 第59-60页 |
| ·方法及剂量 | 第60-61页 |
| ·pVAX1-HA核酸疫苗的免疫效果 | 第61页 |
| 4 小结 | 第61-62页 |
| 结论 | 第62-63页 |
| 参考文献 | 第63-71页 |
| 英文缩略语 | 第71-72页 |
| 附录 | 第72-74页 |
| 致谢 | 第74页 |
