| 摘要 | 第1-9页 |
| ABSTRACT | 第9-11页 |
| 缩略词表 | 第11-12页 |
| 第一部分 文献综述 | 第12-34页 |
| 引言 | 第12页 |
| 一、棉纤维发育相关基因研究进展 | 第12-19页 |
| 1 纤维分化相关基因 | 第13-14页 |
| 2 纤维伸长相关基因 | 第14-17页 |
| ·与液泡膨压有关的基因表达 | 第14页 |
| ·与细胞质骨架组织化有关的基因表达 | 第14-16页 |
| ·与细胞壁生长有关的基因表达 | 第16-17页 |
| 3 纤维细胞次生壁合成相关基因 | 第17-19页 |
| 4 纤维成熟相关基因 | 第19页 |
| 二、β-甘露糖苷酶基因研究进展 | 第19-20页 |
| 三、反义RNA技术研究进展 | 第20-25页 |
| 1 反义RNA的概念及其发现 | 第20页 |
| 2 反义RNA的作用原理 | 第20-21页 |
| ·原核生物细胞中的反义作用 | 第20-21页 |
| ·真核生物细胞中的反义作用 | 第21页 |
| ·其它作用 | 第21页 |
| 3 反义RNA技术在植物基因工程中的应用 | 第21-25页 |
| ·反义技术用于研究未知基因的功能 | 第22页 |
| ·反义基因在植物抗病性方面的应用 | 第22-23页 |
| ·反义基因在瓜菜延熟保鲜方面的应用 | 第23页 |
| ·反义基因在改变植物花色上的应用 | 第23-24页 |
| ·作物品质改良 | 第24页 |
| ·在植物雄性不育及育性恢复中的应用 | 第24页 |
| ·反义基因技术抑制毒素合成 | 第24-25页 |
| 四、植物转基因技术研究进展 | 第25-32页 |
| 1 载体转移法 | 第25-26页 |
| 2 无载体转化法 | 第26-28页 |
| 3 棉花基因转化研究进展 | 第28-32页 |
| ·棉花再生体系的建立 | 第29-30页 |
| ·农杆菌介导法 | 第30-31页 |
| ·基因枪法 | 第31-32页 |
| ·茎尖转化 | 第32页 |
| ·花粉管通道法 | 第32页 |
| 五、本研究的目的、意义 | 第32-34页 |
| 第二部分 研究报告 | 第34-79页 |
| 1 材料与方法 | 第34-50页 |
| ·实验材料 | 第34-40页 |
| ·植物材料 | 第34页 |
| ·菌株和质粒 | 第34-36页 |
| ·细菌培养基 | 第36页 |
| ·组织培养培养基 | 第36页 |
| ·试剂 | 第36-40页 |
| ·本研究的技术路线 | 第40-41页 |
| ·植物表达载体的构建 | 第41-45页 |
| ·大肠杆菌质粒DNA的提取(碱裂解法) | 第41页 |
| ·质粒DNA的酶切 | 第41页 |
| ·目的片段的回收 | 第41页 |
| ·线性载体DNA5’末端去磷酸化 | 第41-42页 |
| ·连接反应 | 第42页 |
| ·连接产物的转化 | 第42-43页 |
| ·重组质粒的鉴定 | 第43-44页 |
| ·重组质粒的酶切鉴定 | 第43页 |
| ·重组质粒的PCR鉴定 | 第43页 |
| ·测序 | 第43-44页 |
| ·植物表达载体的农杆菌转化 | 第44-45页 |
| ·农杆菌感受态的制备及转化 | 第44页 |
| ·农杆菌质粒的提取 | 第44页 |
| ·重组质粒的PCR检测 | 第44-45页 |
| ·农杆菌介导的棉花遗传转化 | 第45-46页 |
| ·受体外植体的准备 | 第45页 |
| ·用于转化的携带质粒的农杆菌的准备 | 第45页 |
| ·基因转化 | 第45页 |
| ·诱导愈伤组织和继代培养 | 第45-46页 |
| ·再生苗的嫁接 | 第46页 |
| ·转基因植株的分子检测 | 第46-50页 |
| ·再生植株的DNA提取(CTAB小量提取法) | 第46页 |
| ·再生植株的PCR检测 | 第46-47页 |
| ·叶片的卡那抗性检测 | 第47页 |
| ·Southern杂交分析 | 第47-50页 |
| ·基因组DNA的提取 | 第47-48页 |
| ·基因组NDA的酶切 | 第48页 |
| ·地高辛标记探针 | 第48-49页 |
| ·Southern杂交尼龙膜的制备 | 第49页 |
| ·杂交及洗膜 | 第49-50页 |
| 2 结果与分析 | 第50-71页 |
| ·植物表达载体的构建 | 第50-56页 |
| ·pBI121-E6-ManA2的正义,反义表达载体的构建 | 第50页 |
| ·pBI121-E6-ManA2的正义,反义表达载体的鉴定 | 第50-56页 |
| ·农杆菌介导的棉花遗传转化 | 第56-59页 |
| ·组织培养再生成苗 | 第56-58页 |
| ·农杆菌活力和浸染时间对转化的影响 | 第56页 |
| ·抗性愈伤组织的诱导和继代 | 第56-57页 |
| ·再生植株的获得 | 第57-58页 |
| ·两种受体出愈率和分化率的比较 | 第58页 |
| ·阳性植株的嫁接 | 第58-59页 |
| ·分化的阳性愈伤系 | 第59页 |
| ·转基因植株的分子检测 | 第59-66页 |
| ·PCR技术对再生植株的初步分析 | 第59-62页 |
| ·用NPTⅡ引物对再生植株的PCR | 第60-61页 |
| ·启动子-基因特异引物对再生植株的PCR | 第61-62页 |
| ·分化克隆系的阳性率 | 第62页 |
| ·NPTⅡ引物和启动子-基因特异引物扩增的阳性率比较 | 第62-63页 |
| ·Southern杂交分析 | 第63-66页 |
| ·卡那霉素的抗性检测 | 第66页 |
| ·T_0代转基因棉花纤维与受体纤维的比较 | 第66-67页 |
| ·部分转基因株系T_0,T_1,T_2比较 | 第67-70页 |
| ·转基因植株的遗传分析 | 第70-71页 |
| 3 讨论 | 第71-79页 |
| ·植物表达载体的构建 | 第71-72页 |
| ·酶切位点的选择 | 第71-72页 |
| ·影响限制性内切酶酶切效果的因素 | 第72页 |
| ·目标片段的回收 | 第72页 |
| ·连接反应 | 第72页 |
| ·农杆菌介导的棉花遗传转化 | 第72-76页 |
| ·棉花遗传转化的方法 | 第73-74页 |
| ·棉花遗传转化中的筛选策略 | 第74-75页 |
| ·植株再生的影响因素 | 第75页 |
| ·再生苗的嫁接 | 第75-76页 |
| ·转基因植株的分子检测 | 第76-78页 |
| ·PCR检测的可行性 | 第76-77页 |
| ·用于PCR反应的转化植株DNA的提取 | 第76-77页 |
| ·PCR引物的设计 | 第77页 |
| ·外源基因的遗传特性 | 第77-78页 |
| ·下一步工作设想 | 第78-79页 |
| 全文结论 | 第79-80页 |
| 参考文献 | 第80-91页 |
| 致谢 | 第91页 |
