| 摘要 | 第1-8页 |
| Abstract | 第8-10页 |
| 第一章 抗O型口蹄疫病毒单克隆抗体的制备和初步应用 | 第10-43页 |
| 1 文献综述 | 第10-17页 |
| 1．1 口蹄疫的流行及其危害 | 第10-11页 |
| 1．2 口蹄疫病毒的特性 | 第11-14页 |
| 1．2．1 口蹄疫病毒分类位置 | 第11-12页 |
| 1．2．2 FMDV的抗原变异性 | 第12-13页 |
| 1．2．3 FMDV分子生物学研究进展 | 第13-14页 |
| 1．3 口蹄疫诊断技术研究进展 | 第14-16页 |
| 1．3．1 病原学诊断 | 第14-15页 |
| 1．3．2 抗体检测 | 第15页 |
| 1．3．3 鉴别诊断 | 第15-16页 |
| 1．4 单克隆抗体在口蹄疫病毒研究中的应用 | 第16-17页 |
| 1．4．1 单抗在FMDV中和抗原的分析与定位中的应用 | 第16-17页 |
| 1．4．2 单抗在口蹄疫诊断和检疫中的应用 | 第17页 |
| 2 研究目的和意义 | 第17-18页 |
| 3 材料与方法 | 第18-27页 |
| 3．1 材料 | 第18-19页 |
| 3．1．1 细胞，病毒，动物 | 第18页 |
| 3．1．2 培养基及主要试剂 | 第18-19页 |
| 3．1．3 主要仪器 | 第19页 |
| 3．2 方法 | 第19-27页 |
| 3．2．1 口蹄疫病毒的扩增及纯化 | 第19-20页 |
| 3．2．2 兔抗FMDV高免血清的制备与效价测定 | 第20-21页 |
| 3．2．3 单克隆抗体的制备 | 第21-25页 |
| 3．2．4 双抗体夹心ELISA方法的建立 | 第25-27页 |
| 4 结果与分析 | 第27-38页 |
| 4．1 病毒的纯化 | 第27-28页 |
| 4．1．1 病毒蛋白含量的测量 | 第27页 |
| 4．1．2 病毒毒力的测定结果 | 第27-28页 |
| 4．2 多抗血清效价测定结果 | 第28-29页 |
| 4．3 细胞融合 | 第29页 |
| 4．3．1 三次融合后结果分析 | 第29页 |
| 4．3．2 细胞融合后结果观察 | 第29页 |
| 4．4 杂交瘤细胞的筛选 | 第29-31页 |
| 4．4．1 间接ELISA方法筛选杂交瘤细胞 | 第29-30页 |
| 4．4．2 单抗的特异性测定结果 | 第30-31页 |
| 4．5 单克隆抗体抗原表位的鉴定结果 | 第31页 |
| 4．6 间接免疫荧光法检测单克隆抗体 | 第31-32页 |
| 4．7 杂交瘤细胞染色体数的检测 | 第32-33页 |
| 4．8 双抗体夹心ELISA方法的建立 | 第33-38页 |
| 4．8．1 抗FMDV多抗最佳包被浓度的确定 | 第33页 |
| 4．8．2 封闭液的选择 | 第33-34页 |
| 4．8．3 三种不同稀释液的比较 | 第34页 |
| 4．8．4 抗FMDV单克隆抗体最佳工作浓度的确定 | 第34-35页 |
| 4．8．5 检测抗原最佳反应时间的确定 | 第35页 |
| 4．8．6 酶标抗体反应时间的确定 | 第35页 |
| 4．8．7 底物的最佳反应时间的选择 | 第35-36页 |
| 4．8．8 临界值的确定 | 第36页 |
| 4．8．9 敏感性测定结果 | 第36页 |
| 4．8．10 异性检测的结果 | 第36页 |
| 4．8．11 重复性测定结果 | 第36-38页 |
| 5 讨论 | 第38-42页 |
| 5．1 多抗的制备 | 第38页 |
| 5．2 小鼠的免疫 | 第38-39页 |
| 5．3 细胞融合 | 第39页 |
| 5．4 融合后杂交瘤细胞的培养 | 第39-40页 |
| 5．5 单抗的筛选 | 第40页 |
| 5．6 克隆 | 第40-41页 |
| 5．7 FMDV的检测 | 第41-42页 |
| 6 小结 | 第42-43页 |
| 第二章 口蹄疫病毒多抗原基因(VP1-VP3-3C)在大肠杆菌中的融合表达 | 第43-57页 |
| 1 研究目的和意义 | 第43-44页 |
| 2 材料与方法 | 第44-52页 |
| 2．1 材料 | 第44-47页 |
| 2．1．1 菌株及载体 | 第44-45页 |
| 2．1．2 酶类及试剂盒 | 第45页 |
| 2．1．3 主要溶液和试剂 | 第45-47页 |
| 2．1．4 培养基 | 第47页 |
| 2．1．5 引物 | 第47页 |
| 2．2 方法 | 第47-52页 |
| 2．2．1 感受态细胞的制备(氯化钙法) | 第47页 |
| 2．2．2 PCR扩增VP1-VP3-3C基因 | 第47-48页 |
| 2．2．3 PCR产物的鉴定及克隆 | 第48页 |
| 2．2．4 DNA片段的回收 | 第48页 |
| 2．2．5 PCR产物的克隆 | 第48页 |
| 2．2．6 连接产物的转化 | 第48-49页 |
| 2．2．7 质粒的制备(碱裂解法) | 第49页 |
| 2．2．8 重组质粒的鉴定 | 第49页 |
| 2．2．9 重组质粒序列测定 | 第49-50页 |
| 2．2．10 原核表达质粒的构建 | 第50-51页 |
| 2．2．11 转化大肠杆菌BL21 | 第51页 |
| 2．2．12 大肠杆菌BL21(DE3)的诱导表达 | 第51页 |
| 2．2．13 表达蛋白的鉴定 | 第51-52页 |
| 2．2．14 表达蛋白的提取、变性与复性 | 第52页 |
| 3 结果与分析 | 第52-55页 |
| 3．1 VP1-VP3-3C基因的PCR扩增结果 | 第52-53页 |
| 3．2 重组质粒pMD-18T-VP1-VP3-3C的PCR和酶切鉴定 | 第53页 |
| 3．3 重组表达质粒pKG-VP1-VP3-3C的PCR和酶切鉴定 | 第53-54页 |
| 3．4 重组多抗原基因的表达及检测 | 第54-55页 |
| 4 讨论 | 第55页 |
| 5 小结 | 第55-57页 |
| 参考文献 | 第57-64页 |
| 缩略词表(Abbreviation) | 第64-65页 |
| 致谢 | 第65页 |
