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玉米根系蛋白磷酸酶ZmPP2C基因的克隆、表达特性及转化的研究

中文摘要第1-9页
英文摘要第9-11页
英文缩略表第11-13页
1 引言第13-22页
   ·逆境胁迫与信号转导第13-15页
     ·细胞信号转导系统第14-15页
     ·蛋白质的可逆磷酸化第15页
   ·蛋白磷酸酶第15-21页
     ·蛋白磷酸酶的发现第15-16页
     ·蛋白磷酸酶的分类、结构及生化特性第16-17页
     ·蛋白磷酸酶的生理功能第17-21页
       ·调控植物生长发育第18页
       ·参与植物抗逆响应第18-19页
       ·参与信号转导第19-20页
       ·在细胞周期和基因转录中的作用第20-21页
   ·本课题的研究目的及意义第21-22页
2 材料与方法第22-44页
   ·试验材料与处理第22-23页
     ·植物材料第22页
     ·材料处理第22页
     ·菌株与质粒第22页
     ·酶及生化试剂第22-23页
     ·PCR 引物第23页
   ·试验方法第23-44页
     ·利用TRIZOL 试剂盒提取RNA第23-25页
     ·利用 CTAB 法提取 RNA第25-26页
     ·反转录cDNA 第一条链的合成第26页
     ·cDNA 全长序列的获得第26-29页
       ·简并引物 PCR 获得 ZmPP2C 中间片段第26-28页
       ·ZmPP2C 基因全长的分离第28-29页
     ·玉米 ZmPP2C 基因的克隆及鉴定第29-33页
       ·大肠杆菌感受态细胞的制备第29页
       ·连接反应第29-30页
       ·转化及克隆筛选第30-31页
       ·碱法小量提取质粒 DNA第31-32页
       ·酶切鉴定第32页
       ·序列测定和数据分析第32-33页
     ·RNA 的提取、转膜及 Northern 杂交第33-34页
       ·RNA 提取及电泳第33页
       ·转膜及烘膜第33页
       ·探针合成第33-34页
       ·预杂交、杂交及放射自显影第34页
     ·DNA 的提取、转膜及 Southern 杂交第34-36页
       ·基因组 DNA 的提取(SDS 法)第34-35页
       ·基因组 DNA 的限制性内切酶消化第35-36页
       ·转膜第36页
       ·探针合成第36页
       ·预杂交、杂交及放射自显影第36页
     ·表达载体的构建第36-39页
       ·碱法大量提取质粒 DNA第36-38页
       ·PBI-ZmPP2C 表达载体构建第38-39页
     ·根癌农杆菌 C58C1 感受态细胞的制备及转化第39-41页
       ·农杆菌感受态细胞的制备第39-40页
       ·冻融法转化农杆菌第40页
       ·农杆菌介导的烟草转化第40-41页
     ·转基因烟草植株的 PCR 检测及生理指标的测定第41-44页
       ·CTAB 微量法提取基因组 DNA第41-42页
       ·转基因烟草植株的 PCR 筛选第42-43页
       ·转基因烟草 Northern 检测第43页
       ·转基因烟草植株光合指标及荧光参数的测定第43-44页
3 结果与分析第44-60页
   ·玉米ZmPP2C 基因的克隆与序列分析第44-50页
     ·ZmPP2C 基因中间片段的分离第44-45页
     ·玉米 ZmPP2C 基因全长cDNA 的克隆第45-48页
     ·五种植物蛋白磷酸酶2C 基因的同源性序列比较第48-49页
     ·PP2C 序列系统发生分析第49-50页
   ·ZmPP2C 基因在玉米基因组中的存在状况及其表达特性第50-53页
     ·玉米 ZmPP2C 的基因组 Southern 杂交分析第50-51页
     ·玉米 ZmPP2C 基因的表达分析第51-53页
       ·ZmPP2C 基因的表达特性第51页
       ·ZmPP2C 基因对信号调节物质和干旱胁迫的应答第51-52页
       ·干旱胁迫下 ZmPP2C 基因在玉米中的表达特性第52-53页
       ·低温胁迫对 ZmPP2C 基因转录表达的影响第53页
   ·ZmPP2C 基因转化烟草及转基因烟草植株的生理反应第53-60页
     ·正义表达载体 PBI-ZmPP2C 的构建第53-55页
     ·正义表达载体的酶切鉴定第55页
     ·表达载体转化农杆菌的 PCR 检测第55-56页
     ·ZmPP2C 基因转化烟草及转基因植株检测第56-57页
       ·转基因植株的 PCR 检测第56-57页
       ·转基因植株的 Northern 检测第57页
     ·低温胁迫对转基因烟草生理性状的影响第57-60页
       ·低温胁迫对转基因烟草叶片光合作用的影响第57-58页
       ·低温胁迫下 PSⅡ反应中心的可逆失活第58-60页
4 讨论第60-64页
   ·玉米 ZmPP2C 基因及其同源基因之间的序列分析第60页
   ·玉米 ZmPP2C 基因表达模式与信号调节物质及干旱胁迫的关系第60-61页
   ·逆境胁迫与 ZmPP2C 基因的表达调控第61-62页
   ·玉米 ZmPP2C 基因可能的信号转导机制及其生理功能第62-64页
5 结论第64-65页
参考文献第65-73页
致谢第73-74页
硕士期间发表论文情况第74页

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