| 中文摘要 | 第1-14页 |
| 英文摘要 | 第14-17页 |
| 前言 | 第17-20页 |
| 第一章 溶栓酶的产生菌筛选、鉴定及其基因克隆 | 第20-43页 |
| 摘要 | 第21-22页 |
| 1 引言 | 第22-23页 |
| 2 材料和方法 | 第23-31页 |
| ·材料 | 第23页 |
| ·实验方法 | 第23-31页 |
| 3 结果 | 第31-37页 |
| ·溶栓酶产生菌ML-909的表型和生化鉴定 | 第31页 |
| ·溶栓酶产生菌ML-909的分子鉴定 | 第31-34页 |
| ·溶栓酶基因的克隆与序列分析 | 第34-36页 |
| ·MLFE与其它蛋白酶基因的比较 | 第36页 |
| ·ML-909纤溶酶活性的检测 | 第36-37页 |
| 4 讨论 | 第37-40页 |
| ·纤溶酶产生菌的筛选方法 | 第37页 |
| ·纤溶酶基因的同源性 | 第37-38页 |
| ·MLFE基因的结构 | 第38-39页 |
| ·MLFE蛋白质结构的预测 | 第39-40页 |
| 小结 | 第40页 |
| 参考文献 | 第40-43页 |
| 第二章 溶栓酶基因在大肠杆菌中的表达 | 第43-62页 |
| 摘要 | 第44-45页 |
| 1 引言 | 第45-46页 |
| 2 材料和方法 | 第46-53页 |
| ·材料 | 第46-48页 |
| ·实验方法 | 第48-53页 |
| 3 结果 | 第53-58页 |
| ·表达质粒的构建策略 | 第53-54页 |
| ·proDFE和MLFE的PCR扩增 | 第54-55页 |
| ·proDFE和MLFE基因的克隆及重组子的鉴定 | 第55-56页 |
| ·proDFE和MLFE表达质粒的构建 | 第56-57页 |
| ·转化细胞的培养及融合蛋白的诱导表达 | 第57页 |
| ·融合蛋白的纯化 | 第57-58页 |
| ·表达蛋白的溶栓酶活性检测 | 第58页 |
| 4 讨论 | 第58-60页 |
| ·溶栓酶基因在大肠杆菌中的表达 | 第58-59页 |
| ·豆豉溶栓酶基因在大肠杆菌中与MBP基因融合表达的分析 | 第59页 |
| ·在大肠杆菌中表达有活性豆豉溶栓酶的展望 | 第59-60页 |
| 小结 | 第60页 |
| 参考文献 | 第60-62页 |
| 第三章 溶栓酶基因在枯草杆菌中的组成型表达 | 第62-98页 |
| 摘要 | 第63-64页 |
| 1 引言 | 第64-66页 |
| 2 材料和方法 | 第66-73页 |
| ·材料 | 第66-68页 |
| ·实验方法 | 第68-73页 |
| 3 结果 | 第73-89页 |
| ·溶栓酶基因枯草杆菌组成型表达载体的构建策略 | 第73-76页 |
| ·解淀粉芽孢杆菌DC-4α-淀粉酶基因启动子-信号肽编码区的克隆与序列分析 | 第76-78页 |
| ·溶栓酶基因表达质粒的构建与鉴定 | 第78-80页 |
| ·重组溶栓酶基因在枯草杆菌中的表达 | 第80-83页 |
| ·DFE基因工程菌WB-DFE5(WB600／pSU-AmyDFE)发酵条件的研究 | 第83-87页 |
| ·溶栓酶(DFE)基因表达产物(rDFE)的纯化 | 第87-89页 |
| 4 讨论 | 第89-93页 |
| ·解淀粉芽孢杆菌DC-4α-淀粉酶启动子-信号肽序列的分析 | 第89-90页 |
| ·溶栓酶基因前肽的作用 | 第90-91页 |
| ·不同溶栓酶基因在枯草杆菌中表达产物的活性比较 | 第91页 |
| ·表达宿主菌的选择 | 第91-92页 |
| ·rDFE的纯化 | 第92-93页 |
| ·融合基因构建的策略 | 第93页 |
| 小结 | 第93-94页 |
| 参考文献 | 第94-98页 |
| 第四章 豆豉溶栓酶基因在枯草杆菌WB600中的诱导表达 | 第98-119页 |
| 摘要 | 第99-100页 |
| 1 引言 | 第100-101页 |
| 2 材料和方法 | 第101-106页 |
| ·材料 | 第101-102页 |
| ·实验方法 | 第102-106页 |
| 3 结果 | 第106-112页 |
| ·豆豉溶栓酶基因蔗糖诱导表达载体构建策略 | 第106-107页 |
| ·果聚糖蔗糖酶基因启动子-信号肽序列(sacR)的克隆和序列分析 | 第107-108页 |
| ·豆豉溶栓酶融合基因(SacDFE)的构建 | 第108-110页 |
| ·重组表达质粒pSU-SacDFE的构建与鉴定 | 第110页 |
| ·重组质粒pSU-SacDFE在WB600中的诱导表达 | 第110页 |
| ·枯草杆菌感受态细胞转化方法的改进 | 第110-111页 |
| ·融合基因SacDFF表达产物的SDS-PAGE分析 | 第111页 |
| ·不同诱导时间对基因表达的影响 | 第111-112页 |
| 4 讨论 | 第112-115页 |
| ·sacR对豆豉溶栓酶基因表达调控的分析 | 第112-113页 |
| ·提高豆豉溶栓酶基因表达的策略 | 第113-114页 |
| ·枯草杆菌转化方法的比较 | 第114-115页 |
| 小结 | 第115页 |
| 参考文献 | 第115-119页 |
| 文献综述 | 第119-172页 |
| 摘要 | 第120-121页 |
| Ⅰ 蛋白酶表达系统的研究进展 | 第121-149页 |
| 1 原核表达系统 | 第121-134页 |
| ·大肠杆菌表达系统 | 第121-128页 |
| ·枯草杆菌表达系统 | 第128-131页 |
| ·其它原核表达系统 | 第131-134页 |
| 2 真核表达系统 | 第134-147页 |
| ·酵母表达系统 | 第135-143页 |
| ·昆虫细胞表达系统 | 第143-147页 |
| 3 其他的真核表达系统 | 第147-149页 |
| ·木霉表达系统 | 第147-148页 |
| ·丝状真菌表达系统 | 第148-149页 |
| Ⅱ 蛋白酶基因的体外定向进化研究进展 | 第149-158页 |
| 1 酶基因的定点突变 | 第150-151页 |
| 2 随机诱变 | 第151-153页 |
| ·通过易错PCR(error-prone PCR)产生随机突变 | 第151-152页 |
| ·化学诱变剂介导的随机诱变 | 第152页 |
| ·由致突变菌株(mutator strain)产生随机突变 | 第152-153页 |
| 3 基因体外重组 | 第153-157页 |
| ·限制性酶切再连接介导的基因重组 | 第153页 |
| ·DNA改组 | 第153-155页 |
| ·交错延伸技术 | 第155-156页 |
| ·临时模板随机嵌合技术 | 第156-157页 |
| ·SCRATCH技术 | 第157页 |
| 4 筛选 | 第157-158页 |
| 参考文献 | 第158-172页 |
| 致谢 | 第172-173页 |
| 在读期间发表或被接受的论文 | 第173-174页 |
| 声明 | 第174页 |
