| 1 引言 | 第1-29页 |
| ·研究目的意义 | 第13-15页 |
| ·Ri质粒rol基因研究进展 | 第15-18页 |
| ·发根农杆菌Ri质粒 | 第15页 |
| ·Ri质粒中的rol基因 | 第15-18页 |
| ·有关赤霉素的研究进展 | 第18-22页 |
| ·赤霉素的生物合成 | 第18-19页 |
| ·赤霉素生物合成的调节 | 第19-21页 |
| ·赤霉素反应的突变体 | 第21-22页 |
| ·有关GA20-氧化酶的研究进展 | 第22-27页 |
| ·GA20-氧化酶的特征 | 第23-24页 |
| ·GA20-氧化酶基因及其蛋白质 | 第24-25页 |
| ·GA20-氧化酶基因表达调控 | 第25-27页 |
| ·研究的总体思路 | 第27-29页 |
| 2 烟草遗传转化体系的建立 | 第29-34页 |
| ·材料与方法 | 第29-31页 |
| ·供试材料及试剂 | 第29页 |
| ·处理方法 | 第29页 |
| ·培养基配方 | 第29-31页 |
| ·结果与分析 | 第31-33页 |
| ·烟草叶片诱导愈伤实验 | 第31页 |
| ·叶片诱导不定芽分化培养基的筛选 | 第31-32页 |
| ·烟草生根培养基的筛选 | 第32-33页 |
| ·讨论 | 第33-34页 |
| 3 烟草抗生素敏感性实验 | 第34-41页 |
| ·材料与方法 | 第34-35页 |
| ·材料与试剂 | 第34-35页 |
| ·培养基配方 | 第35页 |
| ·抗生素对烟草试管苗影响的处理方法 | 第35页 |
| ·抗生素对农杆菌抑制效果的处理方法 | 第35页 |
| ·调查的项目 | 第35页 |
| ·结果与分析 | 第35-39页 |
| ·不同抗生素对烟草叶片不定芽分化的影响 | 第35-37页 |
| ·卡那霉素和头孢霉素对烟草茎段增殖的影响 | 第37-38页 |
| ·卡那霉素和头孢霉素对烟草试管苗生根的影响 | 第38页 |
| ·羧苄霉素和头孢霉素对农杆菌的抑菌效果 | 第38-39页 |
| ·讨论 | 第39-41页 |
| 4 双价基因植物表达载体的构建 | 第41-59页 |
| ·质粒与菌株 | 第42页 |
| ·细菌培养基配方 | 第42页 |
| ·主要试剂 | 第42-43页 |
| ·DNA聚合酶介绍 | 第42-43页 |
| ·重要仪器 | 第43页 |
| ·载体构建的基本步骤 | 第43-46页 |
| ·质粒提取 | 第43-44页 |
| ·农杆菌感受态细胞制备 | 第44页 |
| ·冰冻法直接转化农杆菌 | 第44页 |
| ·质粒提取，PCR、酶切验证 | 第44-45页 |
| ·载体构建的反应体系 | 第45页 |
| ·目的片段的纯化 | 第45-46页 |
| ·PCR引物序列 | 第46-47页 |
| ·PCR反应程序 | 第47-48页 |
| ·载体构建的策略与方法路线 | 第48-51页 |
| ·GH3／rolB基因表达载体的构建 | 第48-49页 |
| ·35S／GA20ox基因表达载体的构建 | 第49-50页 |
| ·双价基因表达载体的构建 | 第50-51页 |
| ·构建载体的分子鉴定 | 第51-57页 |
| ·pBin19rolB植物表达载体的鉴定 | 第51-52页 |
| ·pBI121GA植物表达载体的鉴定 | 第52-55页 |
| ·pBin19rolBGA(pBinGR)植物表达载体的鉴定 | 第55-56页 |
| ·三种表达载体质粒转化农杆菌 | 第56-57页 |
| ·插入片段的测序 | 第57页 |
| ·讨论 | 第57-59页 |
| 5 烟草的遗传转化 | 第59-65页 |
| ·材料与方法 | 第59-61页 |
| ·转化材料 | 第59页 |
| ·农杆菌与质粒 | 第59页 |
| ·农杆菌的培养与转化步骤 | 第59-60页 |
| ·影响农杆菌转化效果的实验设计 | 第60-61页 |
| ·结果与分析 | 第61-63页 |
| ·预培养时间对烟草叶片转化双价基因的影响 | 第61-62页 |
| ·乙酰丁香酮(AS)对烟草叶片转化双价基因的影响 | 第62页 |
| ·菌液浓度对烟草转化双价基因的影响 | 第62-63页 |
| ·推迟筛选对烟草转化双价基因的影响 | 第63页 |
| ·讨论 | 第63-65页 |
| 6 转基因植株的鉴定与分子检测 | 第65-73页 |
| ·材料与方法 | 第65-66页 |
| ·实验材料 | 第65页 |
| ·实验试剂 | 第65-66页 |
| ·实验设计与方法 | 第66-67页 |
| ·抗生素浓度的进一步筛选 | 第66页 |
| ·转化材料的PCR鉴定 | 第66-67页 |
| ·PCR-Southern分子杂交 | 第67-69页 |
| ·DIG-DNA探针的制备 | 第67-68页 |
| ·转模及DNA的固定 | 第68-69页 |
| ·杂交步骤 | 第69页 |
| ·洗模 | 第69页 |
| ·显色反应 | 第69页 |
| ·结果与分析 | 第69-72页 |
| ·转基因烟草的卡那霉素鉴定 | 第70页 |
| ·转基因烟草的PCR鉴定 | 第70-71页 |
| ·转基因烟草的PCR-Southern鉴定 | 第71-72页 |
| ·讨论 | 第72-73页 |
| 7 基因的功能验证及转化植株的形态变化分析 | 第73-78页 |
| ·材料与方法 | 第73-74页 |
| ·实验材料 | 第73页 |
| ·实验设计及统计方法 | 第73-74页 |
| ·转基因烟草的形态变化 | 第74页 |
| ·转rolB基因烟草的形态变化 | 第74页 |
| ·转pttGA20ox基因烟草的形态变化 | 第74页 |
| ·转双价基因烟草的形态特征 | 第74页 |
| ·转基因烟草的形态特征 | 第74-76页 |
| ·转rolB基因烟草的形态特征 | 第74-75页 |
| ·转pttGA20ox基因烟草的形态特征 | 第75-76页 |
| ·讨论 | 第76-77页 |
| ·进一步需要研究的问题 | 第77-78页 |
| 8 结论 | 第78-81页 |
| 参考文献 | 第81-90页 |
| 附录1 | 第90-91页 |
| 附录2 | 第91-93页 |
| 附录3 | 第93-94页 |
| 附录4 | 第94-95页 |
| 附录5 | 第95-96页 |
| 附录6 | 第96-97页 |
| 个人简介 | 第97-98页 |
| 导师简介 | 第98-100页 |
| 致谢 | 第100页 |