猪A组轮状病毒VP6基因的克隆与表达
| 中文摘要 | 第1-10页 |
| 英文摘要 | 第10-13页 |
| 第一部分 轮状病毒前言 | 第13-25页 |
| 一、 概况 | 第13页 |
| 二、 结构和抗原特性 | 第13-16页 |
| 1 、 VP4 | 第14页 |
| 2 、 VP7 | 第14-15页 |
| 3 、 VP6 | 第15-16页 |
| 三、 腹泻机制 | 第16-17页 |
| 四、 RV感染的免疫保护机制 | 第17-22页 |
| 1 、 肠局部粘膜免疫机制 | 第17-18页 |
| 2 、 血清抗体的免疫机制 | 第18-19页 |
| 3 、 细胞免疫机制 | 第19-20页 |
| 4 、 主动免疫与被动免疫的关系 | 第20-21页 |
| 5 、 小鼠模型研究得到的RV保护机制 | 第21页 |
| 6 、 其它非免疫机制 | 第21-22页 |
| 五、 RV疫苗研究现状 | 第22-24页 |
| 1 、 发展RV疫苗的必要性 | 第22页 |
| 2 、 疫苗的保护性指标 | 第22页 |
| 3 、 疫苗研制目标 | 第22-23页 |
| 4 、 轮状病毒疫苗发展现状 | 第23-24页 |
| 六、 问题与展望 | 第24-25页 |
| 第二部分 实验内容 | 第25-51页 |
| 实验一 猪A组轮状病毒的细胞培养与增殖特点 | 第25-29页 |
| 1 材料与方法 | 第25-26页 |
| ·试剂的制备 | 第25-26页 |
| ·传代细胞及制备 | 第26页 |
| ·猪轮状病毒 | 第26页 |
| ·病毒接种与收获 | 第26页 |
| 2 结果 | 第26-28页 |
| ·细胞培养病毒方法的比较 | 第26-27页 |
| ·轮状病毒致细胞病变 | 第27-28页 |
| 3 讨论 | 第28-29页 |
| 实验二 猪A组轮状病毒VP6基因的克隆与测序 | 第29-43页 |
| 1 材料与方法 | 第29-35页 |
| ·病毒与菌株 | 第29页 |
| ·试剂 | 第29页 |
| ·培养基的配制 | 第29-30页 |
| ·溶液的配制 | 第30页 |
| ·引物的设计 | 第30页 |
| ·轮状病毒总RNA的提取 | 第30页 |
| ·RT-PCR扩增目的基因 | 第30-32页 |
| ·VP6基因的克隆 | 第32-34页 |
| ·测序鉴定 | 第34-35页 |
| 2 结果 | 第35-42页 |
| ·轮状病毒的RNA提取 | 第35页 |
| ·PCR扩增 | 第35-36页 |
| ·目的片段的回收纯化 | 第36页 |
| ·重组载体的鉴定 | 第36-42页 |
| 3 讨论 | 第42-43页 |
| ·轮状病毒VP6基因的重要意义 | 第42页 |
| ·目的基因的浓度与纯度 | 第42页 |
| ·连接温度的选择 | 第42页 |
| ·DNA聚合酶的选择与酶切位点 | 第42-43页 |
| 实验三 猪A组轮状病毒VP6基因的表达与免疫检测 | 第43-51页 |
| 1 材料与方法 | 第43-46页 |
| ·菌株和质粒 | 第43页 |
| ·SDS-PAGE试剂 | 第43-44页 |
| ·Western印迹试剂 | 第44页 |
| ·重组表达载体构建 | 第44-45页 |
| ·VP6基因表达产物的检测 | 第45-46页 |
| 2 结果 | 第46-50页 |
| ·定量连接 | 第46-47页 |
| ·重组表达载体pW425t-VP6筛选鉴定 | 第47-49页 |
| ·表达产物SDS-PAGE分析 | 第49页 |
| ·Western-blot分析 | 第49-50页 |
| 3 讨论 | 第50-51页 |
| ·生长功能弥补鉴定要进行严格无菌操作 | 第50页 |
| ·VP6基因在大肠杆菌中表达的意义 | 第50-51页 |
| 结论 | 第51-52页 |
| 参考文献 | 第52-58页 |
| 致谢 | 第58页 |
