| 1 前言 | 第1-20页 |
| ·α-淀粉酶概述 | 第8-12页 |
| ·α-淀粉酶的性质 | 第8-10页 |
| ·pH对酶活性的影响 | 第9页 |
| ·温度对酶活性的影响 | 第9页 |
| ·淀粉的吸附性与酚基α-麦芽糖苷的水解力 | 第9页 |
| ·Ca~(2+)与α-淀粉酶活性的关系 | 第9页 |
| ·α-淀粉酶的氨基酸组成 | 第9-10页 |
| ·α-淀粉酶的水解方式及水解极限 | 第10页 |
| ·α-淀粉酶的转苷作用 | 第10页 |
| ·α-淀粉酶的生产 | 第10-12页 |
| ·生产发展概况 | 第10-11页 |
| ·生产概要 | 第11页 |
| ·α-淀粉酶的提取和浓缩 | 第11-12页 |
| ·α-淀粉酶活力的测定 | 第12页 |
| ·耐高温α-淀粉酶 | 第12-15页 |
| ·耐高温α-淀粉酶的结构 | 第13页 |
| ·热稳定性 | 第13页 |
| ·pH值稳定范围 | 第13页 |
| ·酶与金属离子 | 第13-14页 |
| ·耐高温α-淀粉酶的应用 | 第14-15页 |
| ·啤酒工业 | 第14页 |
| ·酒精工业 | 第14页 |
| ·味精及淀粉糖工业 | 第14页 |
| ·柠檬酸及其他工业 | 第14-15页 |
| ·耐高温α-淀粉酶的发展趋势 | 第15页 |
| ·耐酸性高温α-淀粉酶 | 第15-16页 |
| ·耐酸性高温α-淀粉酶的特性 | 第15页 |
| ·耐酸机制 | 第15页 |
| ·耐酸性高温α-淀粉酶的应用 | 第15页 |
| ·耐酸性高温α-淀粉酶的研究进展 | 第15-16页 |
| ·耐酸性高温α-淀粉酶生产菌株育种进展 | 第16-17页 |
| ·直接从自然界筛选 | 第16页 |
| ·基因突变与诱变育种 | 第16-17页 |
| ·遗传重组育种 | 第17页 |
| ·基因工程与定向育种 | 第17页 |
| ·本论文的立项背景 | 第17-18页 |
| ·本论文的研究内容 | 第18-20页 |
| 2 材料与方法 | 第20-33页 |
| ·材料 | 第20-26页 |
| ·菌种及质粒 | 第20页 |
| 2 1.2 主要药品 | 第20-21页 |
| ·工具酶及标准蛋白 | 第21-22页 |
| ·抗生素 | 第22页 |
| ·主要仪器 | 第22页 |
| ·相关溶液 | 第22-25页 |
| ·培养基 | 第25-26页 |
| ·实验方法 | 第26-33页 |
| ·培养条件 | 第26页 |
| ·菌体保存 | 第26页 |
| ·生长曲线的测定方法 | 第26页 |
| ·地衣芽孢杆菌耐高温α-淀粉酶活力测定方法 | 第26-27页 |
| ·新型耐高温α-淀粉酶活力测定力法 | 第27页 |
| ·大肠杆菌中质粒的提取 | 第27-28页 |
| ·地衣芽孢杆菌染色体DNA的提取 | 第28页 |
| ·DNA沉淀 | 第28页 |
| ·DNA溶液中蛋白质及RNA的去除 | 第28-29页 |
| ·质粒DNA对大肠杆菌的转化 | 第29-30页 |
| ·氯化钙转化法 | 第29页 |
| ·电击转化 | 第29-30页 |
| ·聚合酶链式反应(PCR) | 第30页 |
| ·重组PCR(recombinant PCR) | 第30-31页 |
| ·琼脂糖凝胶电泳 | 第31页 |
| ·SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳 | 第31-33页 |
| ·聚丙烯酰胺凝胶的制备 | 第31-32页 |
| ·样品处理 | 第32页 |
| ·电泳 | 第32页 |
| ·染色和脱色 | 第32-33页 |
| 3 结果与讨论 | 第33-56页 |
| ·出发菌株的生理及生产特性 | 第33-36页 |
| ·出发菌株的生理特性 | 第33页 |
| ·生长曲线的测定 | 第33-34页 |
| ·菌种产酶能力的测定 | 第34页 |
| ·酶作用最适温度的测定 | 第34-35页 |
| ·酶作用最适pH值的测定 | 第35-36页 |
| ·目的基因的制备 | 第36-38页 |
| ·地衣芽孢杆菌染色体DNA的提取 | 第36页 |
| ·PCR扩增 | 第36-38页 |
| ·引物的设计 | 第36-37页 |
| ·PCR扩增目的基因 | 第37-38页 |
| ·酶切验证 | 第38页 |
| ·重组质粒pUAM的构建 | 第38-40页 |
| ·质粒图谱 | 第38-39页 |
| ·目的基因的酶切及纯化 | 第39页 |
| ·质粒的酶切 | 第39-40页 |
| ·目的基因与pUC19载体的连接 | 第40页 |
| ·克隆与转化 | 第40-41页 |
| ·大肠杆菌感受态细胞的制备 | 第40页 |
| ·转化 | 第40-41页 |
| ·pUC19质粒的转化及鉴定 | 第40-41页 |
| ·重组质粒pUAM的转化 | 第41页 |
| ·阳性转化子的检出与鉴定 | 第41-44页 |
| ·初筛 | 第41页 |
| ·酶切鉴定 | 第41-42页 |
| ·表达产物的鉴定 | 第42-43页 |
| ·菌体中表达产物的鉴定 | 第42页 |
| ·发酵液中表达产物的鉴定 | 第42-43页 |
| ·讨论 | 第43-44页 |
| ·耐高温α-淀粉酶基因序列的测定及序列比较 | 第44-48页 |
| ·重组表达质粒pGAM的构建 | 第48-51页 |
| ·pGEM-3Zf(+)质粒 | 第48-49页 |
| ·构建重组表达质粒pGAM | 第49-50页 |
| ·重组表达质粒的克隆、筛选及验证 | 第50页 |
| ·SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳检测外源蛋白的表达 | 第50-51页 |
| ·重组PCR法对耐高温α-淀粉酶基因进行点突变 | 第51-56页 |
| ·重叠引物的设计 | 第51页 |
| ·利用重组PCR进行点突变 | 第51-52页 |
| ·重组PCR获得第134位氨基酸和第320位氨基酸突变基因 | 第52-54页 |
| ·常规PCR扩增 | 第52-53页 |
| ·重组PCR扩增 | 第53-54页 |
| ·突变基因在大肠杆菌中的克隆 | 第54-55页 |
| ·讨论 | 第55-56页 |
| 4 结论 | 第56-58页 |
| 5 展望 | 第58-59页 |
| 参考文献 | 第59-62页 |
| 致谢 | 第62-63页 |
| 论文发表情况 | 第63-64页 |
| 附录 耐高温α-淀粉酶基因序列测定结果 | 第64-67页 |